凝血因子Xa抑制劑的計算機輔助設(shè)計和藥理學(xué)活性研究.pdf

1、目的:通過計算機輔助設(shè)計，從理論上研究凝血因子Xa活性口袋的結(jié)合模式，以理論研究為基礎(chǔ)，設(shè)計并合成TY602系列化合物，再通過動物模型和體外實驗觀察部分TY602系列化合物對凝血因子Xa的抑制作用及動靜脈血栓形成的影響。
　　方法:在計算機輔助設(shè)計條件下，將上市的和進(jìn)入臨床試驗階段的口服凝血因子Xa抑制劑做為模板，通過分子對接和分子動力學(xué)的研究，設(shè)計出新的TY602系列化合物并合成。對天然植物分子庫進(jìn)行篩選，采用分子對接方法得到凝

2、血因子Xa受體與連翹苷D(FTD)的合理復(fù)合物結(jié)構(gòu)，采用分子動力學(xué)的方法對對接結(jié)果進(jìn)行有水存在500ps的模擬。為評價化合物的活性，采用動靜脈旁路絲線法研究部分TY602系列化合物對大鼠體內(nèi)血栓形成的影響;采用血液凝集試驗研究部分TY602系列化合物對大鼠凝血酶原時間(PT)、活化的部分凝血活酶時間(aPTT)、凝血酶時間(TT)和纖維蛋白原含量(Fg)的影響;采用人凝血因子Xa酶聯(lián)免疫分析試劑盒研究部分TY602系列化合物對FXa體外

3、活性的抑制作用。
　　結(jié)果:理論研究方面:
　　①分子對接計算發(fā)現(xiàn)凝血因子Xa受體1F0R，2P16，2UWP與模板藥和我院合成室設(shè)計的配體小分子結(jié)構(gòu)G score打分均較高，構(gòu)象也較匹配，動力學(xué)計算表明受體2P16與配體的結(jié)合構(gòu)象較穩(wěn)定，分子對接計算篩選出10多個活性接近模板藥物的配體小分子化合物，對進(jìn)一步的化學(xué)合成具有指導(dǎo)意義;
　　②通過分子動力學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，1F0R的原始配體RPR依靠氫鍵作用與受體S1區(qū)域和中間

4、體保持穩(wěn)定的匹配狀態(tài)，以非極性的芳香基與S4區(qū)(Tyr99、Phe174、Trp215)形成了很好的空間匹配。
　　FTD與受體相互作用方式則不同，與受體的S1區(qū)作用較弱，相對而言與S4及中間部的作用較強，導(dǎo)致在相互作用的過程中被受體排斥出來。提示，作為FXa的抑制劑與S1區(qū)結(jié)合的部分結(jié)構(gòu)應(yīng)該相對剛性，能與受體形成較強的氫鍵，在S4區(qū)需要一定的疏水性和芳香性，在中間部分需要一定量的氫鍵來幫助固定配體。
　　動物實驗方面:

5、r>　　大鼠灌服部分TY602系列化合物100mg·kg-1后，可較好地抑制動靜脈旁路絲線上血栓的生成，其中化合物HYF-12，HYF-8，HYF-6表現(xiàn)出一定的抑制血栓形成的作用，抑制百分率分別為43.0％，35.0％，33.4％，以HYF-12的效果為最好(p＜0.01)。大鼠舌下靜脈給予部分TY602系列化合物30mg·kg-1后，PT表現(xiàn)出一定的凝血時間延長的效果，化合物HYF-4和HYF-6與空白組相比，具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0

6、.05)，表明TY602系列部分化合物可能對外源性凝血途徑所致的血栓形成有抑制作用。酶聯(lián)免疫法結(jié)果顯示化合物HYF-1、HYF-3、HYF-11、HYF-12、HYF-14、HYF-15、HYF-17、HYF-18表現(xiàn)出較陽性藥利伐沙班更好的FXa抑制作用(p＜0.05)，其中，HYF12酶抑制率最高。
　　結(jié)論:部分TY602系列化合物對大鼠動靜脈血栓形成具有抑制作用，同時也具有一定的抗凝血作用，凝血因子Xa抑制劑是一種非常有臨