離子交換擴(kuò)張床吸附中生物質(zhì)-吸附劑相互作用研究——細(xì)胞破碎和介質(zhì)表面修飾.pdf

1、擴(kuò)張床吸附是一種新型的生化分離技術(shù)，可以直接從細(xì)胞培養(yǎng)液或細(xì)胞勻漿液中捕獲目標(biāo)物，集固液分離、濃縮和初步純化于一個(gè)操作單元中。擴(kuò)張床吸附中應(yīng)用最廣泛是離子交換吸附，吸附容量較大，適用范圍廣。但是，中性pH條件下生物質(zhì)(細(xì)胞或細(xì)胞碎片)一般帶負(fù)電荷，很容易吸附到帶正電荷的陰離子交換介質(zhì)表面，降低吸附容量，破壞床層的穩(wěn)定性。前期研究表明，經(jīng)勻漿處理的生物質(zhì)與吸附劑間相互作用會(huì)減弱。本研究詳細(xì)考察了兩種常用的細(xì)胞破碎方法(超聲破碎和高壓勻漿)

2、的不同操作條件對(duì)生物質(zhì)/吸附劑相互作用的影響。為了深入探索生物質(zhì)/吸附劑相互作用的微觀機(jī)理，引入zeta電位概念，希望找到輔助擴(kuò)張床吸附過程設(shè)計(jì)的控制參數(shù)。 選擇Escherichiacoli，Bacillussubtilis和Pichiapastoris作為模型生物質(zhì)(分別代表革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌和酵母菌)；典型的陰離子交換劑STREAMLINEDEAE作為擴(kuò)張床吸附劑。通過生物質(zhì)脈沖響應(yīng)實(shí)驗(yàn)獲得生物質(zhì)穿透指數(shù)(BTI)

3、，用來定量評(píng)估生物質(zhì)/吸附劑間相互作用。BTI的大小和生物質(zhì)/吸附劑相互作用強(qiáng)弱成反比關(guān)系，BTI=0.9可作為含生物質(zhì)料液形成穩(wěn)定擴(kuò)張床層的最低要求。結(jié)果表明，對(duì)于不同的模型生物質(zhì)來說，BTI均隨著超聲功率的增大或者超聲時(shí)間的延長而顯著增加。提高FrenchPress的操作壓力或者增加其循環(huán)破碎次數(shù)也能達(dá)到同樣的效果。在破碎過程中，對(duì)細(xì)胞碎片的平均粒徑和zeta電位進(jìn)行了測量分析，平均粒徑隨著破碎條件的加強(qiáng)而逐漸減小，最終達(dá)到極限值；

4、在平均粒徑減小的同時(shí)，zeta電位絕對(duì)值也相應(yīng)減小。利用帶電球體(生物質(zhì)顆粒)與帶電平板(吸附劑表面)靜電作用的模型，進(jìn)行必要的簡化后，發(fā)現(xiàn)參數(shù)(-ζA·ζB·dB)可表征擴(kuò)張床中生物質(zhì)/吸附劑間相互作用，其中ζA是吸附劑的zeta電位，ζB是生物質(zhì)的zeta電位，dB是生物質(zhì)的平均粒徑。將BTI值與相應(yīng)的(-ζA·ζB·dB)作圖，兩者之間存在良好的線性關(guān)系。當(dāng)(-ζA·ζB·dB)＜120mV2μm時(shí)，BTI＞0.9，該指標(biāo)可作為細(xì)

5、胞破碎過程的控制參數(shù)。這表明合適的細(xì)胞破碎方法能夠減弱生物質(zhì)/吸附劑相互作用，改善擴(kuò)張床的穩(wěn)定性。同時(shí)應(yīng)用zeta電位參數(shù)可簡化擴(kuò)張床吸附的過程設(shè)計(jì)，更快找到合適的分離條件。 此外本文還對(duì)陰離子交換介質(zhì)表面修飾削弱介質(zhì)/生物質(zhì)相互作用進(jìn)行了初步探索。結(jié)果表明，聚丙烯酸(PAA)修飾的STREAMLINEDEAE確實(shí)能有效減少生物質(zhì)的吸附，同時(shí)不會(huì)對(duì)目標(biāo)蛋白的吸附造成影響。但是，如何確保修飾物質(zhì)在吸附劑的反復(fù)再生過程中穩(wěn)定尚需要進(jìn)