慢病毒載體介導(dǎo)血管生成素-1基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療腦梗死的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、Y1109206分類號tR743學(xué)校代碼：103鴕學(xué)號：2嘲02027福建醫(yī)科大學(xué)博士研究生畢業(yè)論文慢病毒載體介導(dǎo)血管生成素一l基匿修飾的骨髓閭一充質(zhì)干細(xì)胞移植治療腦梗死的實(shí)驗(yàn)研究TreatmentofCerebralInfarctionbyTransplantationofAngiopoietinlGeneModifiedMesenehymalStemCellsMediatedbyLentiviralVector所在院(系)：研究生s

2、學(xué)科(專業(yè))：導(dǎo)師t研究起止日期：附一臨床學(xué)院藩桕齡神經(jīng)病學(xué)張志堅(jiān)教授2005年2月至2007年2月二00七年三月慢病毒載體介導(dǎo)血管生成素1基因修飾的骨髓問充質(zhì)干細(xì)胞移植治療腦梗死的實(shí)驗(yàn)研究中文摘要腦梗死是人類致死的三大疾病之一，其高致殘性給患者、家庭和社會(huì)帶來沉重的負(fù)擔(dān)。長期以來，人們認(rèn)為中樞神經(jīng)損傷后引起神經(jīng)細(xì)胞不可逆的死亡，損傷的神經(jīng)元只能被膠質(zhì)細(xì)胞所填充，形成膠質(zhì)疤痕，從而喪失了神經(jīng)功能近年來，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchy

3、malstemcells，MSCs)移植治療腦梗死已成為研究熱點(diǎn)。MSCs作為種子細(xì)胞，在體內(nèi)可囪多種急性損傷后的組織遷移并定位，在局部微環(huán)境的調(diào)控下分化為不同的組織細(xì)胞。MSCs為組織結(jié)構(gòu)和功能修復(fù)提供了細(xì)胞來源，且易通過血腦屏障，少有免疫排斥反應(yīng)，已成為腦缺血性疾病治療的理想靶細(xì)胞。血管生成素1(Angiopoietin1，Ang1)是一類重要的血管生長因子，特異性地作用于內(nèi)皮細(xì)胞，參與血管生成的調(diào)控過程，Ang1通過干預(yù)內(nèi)皮細(xì)胞、

4、平滑肌細(xì)胞和周細(xì)胞之間的相互作用促進(jìn)血管生成和重塑，在缺血等病理狀態(tài)下可作為一種關(guān)鍵的血管生成調(diào)節(jié)劑。它可通過促進(jìn)缺血組織周圍側(cè)支循環(huán)形成、穩(wěn)定血管、延緩血管退化；加強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞間的緊密連結(jié)，維持血腦屏障的完整性；保護(hù)神經(jīng)元、抑制凋亡等多重作用機(jī)制，從而明顯增加缺血腦組織血流灌注，挽救半賠帶神經(jīng)元。AngI已成為缺血性腦血管病基因治療新的靶點(diǎn)。慢病毒載體具有可感染分裂細(xì)胞及非分裂細(xì)胞、轉(zhuǎn)移基因片段容量較大、目的基因表達(dá)時(shí)間長、不易誘發(fā)宿主

5、免疫反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)，已成為當(dāng)前基因治療中載體研究的熱點(diǎn)。因此。我們設(shè)想通過慢病毒載體的介導(dǎo)，將Ang1基因轉(zhuǎn)移至MSCs中，并將基因修飾的MSCs通過靜脈移植至大腦中動(dòng)脈栓塞模型大鼠中，利用MSCs可向急性損傷病灶趨化聚集的特點(diǎn)，期待MSCs能夠攜帶4ng1基因遷移至損傷部位，發(fā)揮A皿g1和MSCs的協(xié)同治療作用。本課題分為三部分第一部分：血管生成素I基因重組慢病毒載體質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定從Genbank獲得AngI基因序列，結(jié)合載體上的酶切位