小鼠卵母細(xì)胞程序化和OPS玻璃化冷凍效果的比較.pdf

1、背景：自1986年Chen凍存人卵成功10余年來，學(xué)者們雖對卵子冷凍做了大量工作，但進(jìn)展緩慢，人們一直在尋求簡便、經(jīng)濟(jì)、高效的卵子冷凍方法。采用程序化冷凍法，細(xì)胞內(nèi)容易形成冰晶，損傷細(xì)胞膜系統(tǒng)。而玻璃化冷凍法是采用高濃度的冷凍保護(hù)劑，在快速冷凍過程中，形成一種極其黏稠的無結(jié)構(gòu)的玻璃樣狀態(tài)，有效的避免了卵母細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成。玻璃化冷凍法不僅操作簡單，而且省時(shí)，不需要昂貴的儀器，為卵子冷凍帶來了希望。而且，玻璃化冷凍在原有方法的基礎(chǔ)之上不斷

2、地改進(jìn)，追求冷凍保護(hù)液的低毒，為了加速降溫和復(fù)溫速率，人們不斷地在載體上進(jìn)行改進(jìn)，如OPS法，是通過減小管腔和管壁厚度，且僅吸入1-2μL含卵冷凍保護(hù)液，使冷凍速率達(dá)到20000℃/分。盡管如此，由于卵子冷凍技術(shù)的不成熟，它仍然沒有成為一項(xiàng)常規(guī)的治療手段而應(yīng)用于臨床。 目的：本實(shí)驗(yàn)通過建立小鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，比較程序化和OPS玻璃化冷凍效果，探討卵子冷凍的具體方法，為卵子冷凍技術(shù)應(yīng)用于臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：通過促超排卵獲取

3、小鼠M Ⅱ期卵母細(xì)胞，隨機(jī)分組，觀察不同冷凍方法、高濃度的冷凍保護(hù)液，對卵子的成活及進(jìn)一步發(fā)育潛能的影響；不同的IVF前培養(yǎng)時(shí)間凍融卵子的受精及繼續(xù)發(fā)育的影響。 結(jié)果：1．OPS玻璃化冷凍組與程序化冷凍組的存活率、受精率、卵裂率及6-8eell胚形成率均無顯著性差異，但OPS組無論成活率，還是受精率、卵裂率及6-8eell胚形成率，均稍高于程序化冷凍組。2．玻璃化冷凍組與暴露組的卵母細(xì)胞存活率分別為35.3﹪，100﹪，有極顯著

4、性差異(P<0.05)。暴露組與對照組比較的受精率、卵裂率，無顯著性差異(P>0.05)，但前者低于后者。而暴露組與對照組的6-8cell胚形成率分別為41﹪，63﹪，兩組比較，有顯著性差異(P<0.05)。3．玻璃化冷凍法和程序化冷凍法，凍融后的培養(yǎng)2h組和培養(yǎng)1h組的受精率分別為52.4﹪vs13.6﹪，60﹪vs24﹪，無論哪種冷凍方法，兩組比較，均有顯著性差異(P<0.05)。凍融后培養(yǎng)2h組和培養(yǎng)1h組的卵裂率分別為72.7﹪

5、vs33.3﹪，88.9﹪vs33.3﹪，兩組比較，有顯著差異，玻璃化冷凍法和程序化冷凍法的1h組的6-8cell胚形成率均為0：2h組的6-8cell胚形成率分別為28.6﹪，43.8﹪，兩組比較，無顯著性差異(P>0.05)但前者低于后者。 結(jié)論：1．本實(shí)驗(yàn)證實(shí)，OPS玻璃化冷凍法至少可以達(dá)到程序化冷凍法同樣的效果，而OPS玻璃化冷凍法有好于程序化冷凍法的趨勢。加之，其簡便、省時(shí)、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)，因而，更有發(fā)展前景。2．卵母細(xì)胞