應(yīng)用基因沉默技術(shù)改良花生脂肪酸組份.pdf

1、花生是重要的經(jīng)濟(jì)作物，其品質(zhì)改良育種對(duì)國民的生產(chǎn)實(shí)踐具有重要的意義。應(yīng)用傳統(tǒng)的育種技術(shù)隨機(jī)性大，周期長(zhǎng)，特定成分提高幅度有限，農(nóng)業(yè)性狀難以綜合?；蚬こ痰某霈F(xiàn)，為作物的品種改良育種提供了一個(gè)高效的技術(shù)手段，可以大大地縮短育種周期和提高育種效率。因此，應(yīng)用基因工程技術(shù)對(duì)花生脂肪酸組份進(jìn)行品質(zhì)改良目前也是諸多學(xué)者的研究目標(biāo)。 油酸是一種單不飽和脂肪酸，穩(wěn)定性高，能降低有害膽固醇(低密度脂蛋白)，保持有益膽固醇(高密度脂蛋白)的水平，

2、從而減緩動(dòng)脈粥樣硬化，預(yù)防冠心病等心血管疾病的發(fā)生。因此，提高花生種子油酸的相對(duì)含量，增加油酸/亞油酸的比值，提高花生的營養(yǎng)價(jià)值和氧化穩(wěn)定性，已成為目前我國乃至國際上花生品質(zhì)改良育種的重要內(nèi)容。 本研究旨在利用hpRNA介導(dǎo)的基因沉默技術(shù)抑制花生種子中一個(gè)重要的脂肪酸脫氫酶基因——編碼油酰磷脂酰膽堿ω-6脫氫酶基因ahFAD2B的表達(dá)，從而提高油酸的含量，改善花生脂肪酸的組成。研究結(jié)果如下： 1構(gòu)建了種子特異表達(dá)的轉(zhuǎn)化載

3、體pPNHO-3。根據(jù)GeneBank公開發(fā)表的ahFAD2B基因序列設(shè)計(jì)特異引物進(jìn)行PCR，將擴(kuò)增出的基因片段正反連接到含有intron部分序列的中間載體的兩端，構(gòu)成反向重復(fù)序列，并將其克隆到含有大豆凝集素啟動(dòng)子和終止子基因的質(zhì)粒，構(gòu)建成轉(zhuǎn)化載體pPNHO-3。 2建立了農(nóng)桿菌介導(dǎo)ahFAD2B導(dǎo)入花生遺傳轉(zhuǎn)化體系。選擇花生子葉為轉(zhuǎn)化外植體，在芽誘導(dǎo)，分化和誘導(dǎo)生根等培養(yǎng)過程中，確立了125mg/L卡那霉素濃度為合適的篩選壓力