腰椎間盤髓核細(xì)胞活性與MRI退變分型的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景和目的
　　 退行性椎間盤疾病是脊柱外科最常見的病變之一，其退變過程緩慢進(jìn)展。根本病因尚未明確，目前所知椎間盤退變是在多種機(jī)制及細(xì)胞因子的共同作用下，椎間盤內(nèi)的生化結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變，包括：椎間盤細(xì)胞的活性降低，髓核內(nèi)水分丟失，組織成份發(fā)生改變，退變時(shí)椎間盤中蛋白多糖、糖胺聚糖下降，含水量減少。因椎間盤形態(tài)和生化結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，其緩沖、分散壓力傳導(dǎo)的能力下降，機(jī)械性能發(fā)生改變。有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究證明，髓核細(xì)胞活性的降低是椎間盤退變

2、的重要特點(diǎn)。隨著年齡的增長(zhǎng)，椎間盤內(nèi)的脊索細(xì)胞消失，類軟骨細(xì)胞活性降低，同時(shí)伴有細(xì)胞外基質(zhì)分泌減少，膠原成分改變，這些改變使得髓核細(xì)胞分泌外基質(zhì)的能力降低，無(wú)法維持正常的椎間盤內(nèi)部環(huán)境的平衡，正常的椎間盤結(jié)構(gòu)發(fā)生破壞，最終導(dǎo)致其機(jī)械結(jié)構(gòu)的失穩(wěn)。
　　 在臨床工作中，很難對(duì)微觀的生物學(xué)進(jìn)行直接評(píng)估。隨著影像學(xué)技術(shù)的發(fā)展，MRI已經(jīng)成為各級(jí)別醫(yī)院常規(guī)的檢查手段之一，其已被公認(rèn)為目前診斷椎間盤退變最合理精確的手段。近年來(lái)出現(xiàn)了很多基于

3、MRI的椎間盤退變分型，其中最廣泛被接受的MRI退變椎間盤分級(jí)為Pearce制定的五分級(jí)法，是目前能較好反應(yīng)椎間盤退變的分類方法。
　　 本研究通過實(shí)驗(yàn)，對(duì)不同退變程度腰椎間盤的髓核細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)及活性測(cè)定，明確髓核細(xì)胞活性與MRI退變分型的相關(guān)性。
　　 方法
　　 實(shí)驗(yàn)共取腰椎間盤髓核組織20例，均為我科收治單一手術(shù)節(jié)段患者，其中A組2例，為正常椎間盤髓核組織(PearceⅠ&Ⅱ型，脊柱外傷患者，年齡為22歲和

4、24歲)；B、C、D三組分別6例，分別為MRI分型輕、中、重度(PearceⅢ型，Ⅳ型，V型患者)退變椎間盤髓核組織(患者年齡在3545歲之間)，均在同樣條件下進(jìn)行體外髓核細(xì)胞分離培養(yǎng)。
　　 術(shù)中取得腰椎間盤髓核組織送入實(shí)驗(yàn)室，進(jìn)行髓核細(xì)胞的分離與原代培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)過程采用傳一代細(xì)胞，消化原代細(xì)胞計(jì)數(shù)后定量分置于培養(yǎng)板培養(yǎng)，于5d，10d，15d，20d，25d五個(gè)時(shí)間段消化用以細(xì)胞計(jì)數(shù)法和MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞活性。
　　

5、 結(jié)果
　　 細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果：傳一代髓核細(xì)胞計(jì)數(shù)在同時(shí)間點(diǎn)上A組明顯高于B、C、D組，B組與C、D組之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，C組和D組之間細(xì)胞計(jì)數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，細(xì)胞計(jì)數(shù)的峰值出現(xiàn)在第20天。
　　 MTT法測(cè)定結(jié)果：B、C、D組之間OD值(吸光值)在同時(shí)間點(diǎn)，各組之間均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，退變細(xì)胞OD值峰值出現(xiàn)在第20天，此后開始下降，提示細(xì)胞活性降低；正常髓核細(xì)胞OD值下降出現(xiàn)在25天之后。