AnnexinV-PI和Hoechst33342-PI雙染法評價(jià)無鎳奧氏體不銹鋼的生物相容性.pdf

1、目的:
　　 本實(shí)驗(yàn)用中科院金屬研究所研制的新型無鎳奧氏體不銹鋼BIOSSN4的浸提液培養(yǎng)小鼠成纖維細(xì)胞L929,通過Annexin V/PI雙染和Hoechst33342/PI雙染熒光顯微鏡觀測細(xì)胞凋亡形態(tài),利用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率,探討通過凋亡途徑初步檢測評價(jià)BIOSSN4不銹鋼的生物相容性。
　　 材料與方法:
　　 1、實(shí)驗(yàn)分組及金屬材料制備
　　 將實(shí)驗(yàn)材料共分為六組,分別是A組:BIOSS

2、N4不銹鋼:B組:317L不銹鋼;C組:鈷鉻合金;D組:鎳鉻合金;E組:金合金;F組:陰性對照(10％胎牛血清RPMI1640培養(yǎng)液)。其中A組為實(shí)驗(yàn)組,余為對照組。
　　 根據(jù)合金浸提液與L929細(xì)胞共同培養(yǎng)的時(shí)間分為24 h組及48 h組。
　　 先制作成直徑10mm、厚1mm的圓形蠟片,然后將各組材料分別鑄造形成圓形金屬片,打磨拋光后超聲清洗15min,去離子水沖洗3遍,分置于玻璃小瓶中,121℃高壓滅菌后待用。<

3、br>　　 2、材料浸提液制備
　　 無菌下將各金屬圓片分置于24孔板中,每孔加2mL含10％胎牛血清RPMI1640培養(yǎng)液,在37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中連續(xù)浸提72 h后待用。
　　 3、細(xì)胞培養(yǎng)
　　 L929細(xì)胞用含10％胎牛血清的RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)基在37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)并傳代。
　　 4、細(xì)胞凋亡檢測
　　 將陰性對照組及各實(shí)驗(yàn)組合金浸提液與L929細(xì)胞共同培養(yǎng),于培養(yǎng)

4、的24 h、48 h進(jìn)行FITC/PI雙染,熒光顯微鏡下觀察各組凋亡細(xì)胞,通過流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞凋亡率;Hoechst33342/PI雙染,熒光顯微鏡下觀察各組凋亡細(xì)胞,計(jì)算凋亡率。
　　 結(jié)果:
　　 1、Annexin V-FITC/PI雙染和Hoechst33342/PI雙染,熒光顯微鏡觀察實(shí)驗(yàn)各組均可見凋亡細(xì)胞,鏡下檢測凋亡率由低到高順序?yàn)?金合金＜BIOSSN4不銹鋼＜鈷鉻合金＜317L不銹鋼＜鎳鉻合金。<

5、br>　　 2、流式細(xì)胞儀檢測:各組細(xì)胞凋亡率由低到高順序與鏡下檢測結(jié)果相一致。加樣培養(yǎng)24 h細(xì)胞凋亡率,BIOSSN4組與各組差異有顯著性意義(p＜0.05);48 hBIOSSN4組與金合金組差異無顯著性意義(p＞0.05),與其它合金組差異有顯著性意義(p＜0.05)。各組24 h和48 h組間細(xì)胞凋亡率差異有顯著性意義(p＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí):不同金屬合金引起的細(xì)胞凋亡率存在差異