2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩77頁未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、一、目的:揭示成骨細(xì)胞G1期調(diào)節(jié)蛋白Cyclin D1、CDK4、p21與實驗性絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的關(guān)系,并在細(xì)胞分子水平研究健骨顆粒對成骨細(xì)胞G1期調(diào)控的影響,進(jìn)一步探討中醫(yī)藥有效防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的詳細(xì)機(jī)制。 二、方法:1、去卵巢骨質(zhì)疏松模鼠成骨細(xì)胞G1期調(diào)節(jié)蛋白的改變及健骨顆粒干預(yù)作用 (1)建立實驗動物病理模型:切除6月齡SD大鼠卵巢建立絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥動物模型。(2)具體分組與藥物干預(yù):170只6月齡SD雌性大鼠,隨機(jī)

2、分成假手術(shù)組50只和手術(shù)組120只。手術(shù)組進(jìn)行雙側(cè)卵巢結(jié)扎切除術(shù),假手術(shù)組除未行卵巢結(jié)扎切除外,其余步驟與手術(shù)組相同。手術(shù)組在手術(shù)后再分成模型組70只,預(yù)防組50只。預(yù)防組于術(shù)后第2天開始喂服健骨顆粒2g·kg-1·d-1,每天1次。術(shù)后13周模型組再隨機(jī)分出20只為治療組。治療組喂服健骨顆粒2g·kg-1·d-1,假手術(shù)組和模型組喂服生理鹽水2ml·d-1。健骨顆粒以生理鹽水溶解后灌服。治療組、假手術(shù)組及模型組均從術(shù)后第13周起灌服。

3、所有大鼠于術(shù)后4、8、12、18、24周分批取材,每批每組各處死10只。(3)指標(biāo)檢測:應(yīng)用雙能X線骨密度儀測定全身骨密度;運(yùn)用放射免疫法檢測血清E2水平;運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法檢測骨組織中成骨細(xì)胞G1期調(diào)節(jié)蛋白Cyclin D1、CDK4、p21蛋白表達(dá)。2、健骨顆粒含藥血清對體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞G1期調(diào)節(jié)蛋白的影響 (1)建立成骨細(xì)胞體外培養(yǎng)體系:原代細(xì)胞用酶消化法從新生SD大鼠顱蓋骨獲取,經(jīng)堿性磷酸酶染色、鈣化結(jié)節(jié)茜素紅染色鑒定后,取第

4、三代細(xì)胞進(jìn)行實驗。(2)健骨顆粒含藥血清制備:取3月齡清潔級雄性sD大鼠20只,隨機(jī)分為含藥血清組和空白血清組,每組10只,含藥血清組給予健骨顆粒2g·kg-1·d-1,空白血清組灌服生理鹽水2ml·d-1,二組均連續(xù)灌胃7天,取血制備成健骨顆粒含藥血清和生理鹽水空白血清。(3)檢測指標(biāo):MTT法檢測不同含藥血清濃度對成骨細(xì)胞增殖的影響,得出最佳含藥血清濃度;以最佳濃度的含藥血清作用于成骨細(xì)胞24h、48h和72h,以空白血清干預(yù)的細(xì)胞

5、為對照,運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行細(xì)胞周期分析、檢測Cyclin D1陽性細(xì)胞百分含量,運(yùn)用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測Cyclin D1、CDK4、p21蛋白的表達(dá),運(yùn)用RT-PCR法檢測Cyclin D1、CDK4、p21 mRNA表達(dá)。 三、結(jié)果:1、術(shù)后12周后,模型組全身BMD明顯下降(P<0.01),且隨時間推移下降趨勢明顯,預(yù)防組、治療組BMD明顯高于同期模型組,但不及假手術(shù)組;模型組血清E2水平下降明顯(P<0.01),預(yù)防組、治

6、療組E2水平明顯高于同期模型組,預(yù)防組高于治療組,但不及假手術(shù)組;Cyclin D1、CDK4蛋白陽性表達(dá)主要定位于骨小梁表面的成骨細(xì)胞,假手術(shù)組有Cyclin D1、CDK4蛋白陽性表達(dá),模型組、預(yù)防組、治療組表達(dá)強(qiáng)于假手術(shù)組,以預(yù)防組表達(dá)最高,治療組次之;p21蛋白陽性表達(dá)部位與Cyclin D1相似,假手術(shù)組、模型組、預(yù)防組和治療組均有明顯陽性表達(dá),假手術(shù)組表達(dá)最低,模型組的表達(dá)維持在較高水平,在各時期均明顯高于同期假手術(shù)組、預(yù)防

7、組和治療組。2、(1)MTT法檢測顯示健骨顆粒含藥血清濃度為20%時,體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞增殖速度最快,明顯快于同濃度空白血清組(P<0.05)。(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期分布結(jié)果顯示,隨著干預(yù)時間延長,G0/G1期細(xì)胞分?jǐn)?shù)下降,而S期、G2/M期細(xì)胞分?jǐn)?shù)上升,增殖指數(shù)(PI)升高,以含藥血清組變化明顯,干預(yù)24h、48h、72h,其S期細(xì)胞分?jǐn)?shù)、PI均高于空白血清組(P<0.05);流式細(xì)胞術(shù)檢測Cyclin D1陽性細(xì)胞百分含量,含藥

8、血清組明顯高于空白血清組(P<0.01)。(3)免疫細(xì)胞化學(xué)檢測顯示,體外成骨細(xì)胞Cyclin D1、CDK4蛋白有陽性表達(dá),表達(dá)部位主要在細(xì)胞核,隨著干預(yù)時間的延長,含藥血清組和空白血清組Cyclin D1、CDK4蛋白表達(dá)呈上升趨勢,含藥血清組明顯高于空白血清組(P<0.05或P<0.01);在p21的表達(dá)上,二組隨時間的推移則呈下降趨勢,且含藥血清組低于空白血清組,干預(yù)48h、72h時二組比較有顯著性差異(P<0.01)。(4)R

9、T-PCR檢測結(jié)果與免疫細(xì)胞化學(xué)檢測結(jié)果基本一致,干預(yù)48h、72h,含藥血清組Cyclin D1、CDK4 mRNA表達(dá)明顯高于空白血清組(P<0.05或P<0.01);干預(yù)24h,含藥血清組p21 mRNA表達(dá)明顯低于空白血清組(P<0.05),干預(yù)48h、72h,二者的差距更明顯(P<0.01)。 四、結(jié)論:1.去卵巢骨質(zhì)疏松模型大鼠發(fā)病過程中,隨著雌激素水平的下降,成骨細(xì)胞Cyclin D1、CDK4、p21蛋白出現(xiàn)明顯

10、高表達(dá),成骨細(xì)胞增殖加快,同時,成骨細(xì)胞周期受阻滯亦增多,成骨細(xì)胞數(shù)量仍顯相對不足,骨形成低于骨吸收,最終導(dǎo)致骨質(zhì)疏松的發(fā)生。2.健骨顆粒能提高去卵巢骨質(zhì)疏松模型鼠成骨細(xì)胞G1期調(diào)節(jié)蛋白Cyclin D1、CDK4的表達(dá),抑制負(fù)性調(diào)節(jié)因子p21的表達(dá),促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖,這可能是健骨顆粒防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的機(jī)制之一。3 健骨顆粒能提高體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞G1期調(diào)節(jié)蛋白Cyclin D1、CDK4的表達(dá),抑制負(fù)性調(diào)節(jié)因子p21的表達(dá),加快細(xì)胞

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論