祛瘀消積湯對慢性萎縮性胃炎癌前病變逆轉(zhuǎn)作用的實驗研究.pdf

1、慢性萎縮性胃炎伴中重度腸化生和異型增生，是公認(rèn)的胃癌癌前病變。針對慢性萎縮性胃炎癌前病變的治療，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)沒有很好的治療方法。關(guān)于慢性萎縮性胃炎的中醫(yī)研究，成為“八五”攻關(guān)課題。 導(dǎo)師張仲海教授總結(jié)多年的臨床經(jīng)驗，以古今文獻中醫(yī)理論為基礎(chǔ)，提出慢性萎縮性胃炎癌前病變在中醫(yī)屬“胃痞血瘀積證”的觀點。并以此為基礎(chǔ)，創(chuàng)新運用“化瘀消積法”治療慢性萎縮性胃炎癌前病變。以化瘀消積為主，輔以補益氣血為治則組方，經(jīng)長期臨床運用反復(fù)篩選，優(yōu)化而成

2、“祛瘀消積湯”。 目的意義: 通過構(gòu)建“胃痞血瘀積證”大鼠模型，佐證“血瘀積證”觀點；以“祛瘀消積湯”治療“胃痞血瘀積證”模型大鼠，將大鼠的舌象變化、胃腸功能變化、胃黏膜病理變化等作為觀察指標(biāo)，多方論證“祛瘀消積湯”治療慢性萎縮性胃炎癌前病變的療效，以說明“化瘀消積法”是治療慢性萎縮性胃炎癌前病變行之有效的法則，值得臨床推廣應(yīng)用，“祛瘀消積湯”具有新藥研究開發(fā)和應(yīng)用價值。 研究方法 本實驗分為兩部分。第一

3、部分是構(gòu)建“胃痞血瘀積證”大鼠模型，采用致癌劑甲基硝基亞硝基胍（MNNG）加酒精損傷及雷尼替丁的綜合造模法造模。第二部分，是大鼠模型建立成功后，運用自擬方劑“祛瘀消積湯”進行治療，同時設(shè)立正?？瞻讓φ战M、模型對照組、胃復(fù)春陽性藥物對照組，觀察各組的療效差異。研究內(nèi)容和過程 第一部分，通過觀察大鼠的一般情況、舌象變化、胃肉眼觀察變化及胃黏膜的病理改變等，了解造模效果。第二部分，從觀察大鼠的體重的恢復(fù)情況、舌象變化、胃腸功能變化、胃

4、黏膜病理變化、抗炎效果等進行療效分析研究。 體重在大鼠空腹?fàn)顟B(tài)下稱重，每周稱重1次，并計算各組大鼠的平均體重。根據(jù)大鼠體重確定用藥劑量。 舌象觀察每天在給大鼠灌胃時，觀察大鼠舌象，根據(jù)觀察結(jié)果，將舌質(zhì)分為淡紅舌、淡紫舌、舌質(zhì)紫暗、瘀斑舌質(zhì)，在實驗結(jié)束時統(tǒng)計結(jié)果。 抗炎實驗采用玻璃容器法做大鼠足跖腫脹的抗炎實驗，以阿司匹林作為對照藥，在大鼠足跖皮下注射雞蛋清，于第30，60，120，240，360min測量大鼠足跖

5、體積，觀察足跖體積變化。 胃分泌功能先給大鼠作幽門結(jié)扎術(shù)，術(shù)后4小時處死大鼠，取胃，收集胃液。用NaOH作酸堿中和滴定實驗，計算胃液的總酸度，并計算總酸排出量。 胃殘留量實驗本實驗通過檢測大鼠胃內(nèi)甲基橙光密度來研究大鼠的胃排空功能。先用甲基橙溶液給大鼠灌胃，半小時后處死大鼠，用分光光度計測試胃內(nèi)甲基橙的光密度，計算胃殘留率。 小腸推進實驗本實驗通過測量碳素墨水在大鼠腸道中的推進距離來觀察大鼠的胃腸運動功能。先用碳

6、素墨水給大鼠灌胃，半小時后處死大鼠，用直尺測量大鼠黑色小腸的長度，計算小腸推進率。 胃重比稱量大鼠的體重、胃重，通過協(xié)方差分析，以扣除體重對胃重的影響，比較胃重比。 胃黏膜病理切取胃竇部黏膜5x5mm大小1塊，經(jīng)甲醛固定、石蠟包埋、切片、HE染色，光鏡下觀察胃黏膜的萎縮程度、異型增生、腸化生和炎癥程度等。 血液生理檢查心臟取血，做血常規(guī)及肝功能、腎功能、血脂、血粘度等檢查，了解藥物對大鼠的血液、重要臟器功能等的影

7、響。 結(jié)果: 造模完成情況： 一般情況模型組的大鼠毛發(fā)松散，光澤度差，活動減少，食量減少，身體瘦小。與對照組相比有顯著差異。 舌象觀察模型組的大鼠的舌質(zhì)呈現(xiàn)淡紫舌，甚至舌質(zhì)紫暗并有大片瘀斑，表現(xiàn)出血瘀證候，并且隨著實驗進行，舌質(zhì)血瘀征象進一步加重。實驗結(jié)束時統(tǒng)計，模型組的大鼠舌質(zhì)與對照組有顯著性差異。 胃重比扣除體重對胃重的影響，比較胃重比，造模組與對照組有顯著性差異。 胃黏膜肉眼觀察模型

8、組胃體較小，胃黏膜蒼白，胃壁較薄，大部分胃黏膜皺襞走向紊亂，部分區(qū)域皺襞變淺或消失。 胃黏膜病理結(jié)果大鼠胃黏膜HE染色后光鏡下觀察，模型組大多數(shù)呈現(xiàn)出中重度萎縮、腸化生和異型增生。 治療效果： 正常組大鼠精神好，動作敏捷有力，攝食良好，被毛致密有光澤，體肌健壯，大便干燥成粒，舌質(zhì)淡紅。模型組大鼠精神萎靡，蜷縮喜扎堆，食量較少，體重增長慢甚至下降而形體瘦小，毛發(fā)疏松枯黃光澤度差，大便或便溏或大便干燥，瞇眼率和拉尾排

9、便反應(yīng)陽性率增高，足蹼、鼻尖、耳緣淡紫，舌質(zhì)紫暗并有大片瘀斑。經(jīng)祛瘀消積湯或胃復(fù)春治療組，大鼠食量和體重逐漸增加、活動增多、毛發(fā)光澤，舌質(zhì)紫暗癥狀逐漸好轉(zhuǎn)，以祛瘀消積湯中劑量組變化最為明顯；實驗中還觀察到治療組的大鼠大便便質(zhì)稀，以大劑量組最明顯。 舌質(zhì)的觀察模型組與正常組及各治療組間有顯著性差異，而正常組與祛瘀消積湯各組及胃復(fù)春治療組間舌質(zhì)差異無顯著性。足跖抗炎實驗不同分組間有顯著性差異，祛瘀消積湯和阿司匹林藥物有抗炎作用，但阿

10、司匹林的抗炎效果優(yōu)于祛瘀消積湯，而祛瘀消積湯大劑量組的抗炎效果優(yōu)于小劑量及中劑量組。祛瘀消積湯中劑量組與正常對照組胃液分泌量相當(dāng)，差異無顯著性P=0．227；其它各組胃液分泌量有顯著性差異，正常對照組和祛瘀消積湯中劑量組高于大劑量組、胃復(fù)春組、小劑量組、模型組。經(jīng)祛瘀消積湯及胃復(fù)春治療后，“胃痞血瘀積證”大鼠的胃液分泌量增加，祛瘀消積湯中劑量組對胃酸分泌的治療效果要優(yōu)于大劑量組、胃復(fù)春組、小劑量組。 胃液總酸度： 祛瘀消

11、積湯中劑量組及胃復(fù)春組與正常對照組胃液總酸度相當(dāng)，差異無顯著性，分別為P=0．842、P=0．941。 總排酸量： 祛瘀消積湯中劑量組與正常對照組胃液分泌量相當(dāng)，差異無顯著性P=0．231；祛瘀消積湯大劑量組與胃復(fù)春對照組胃液分泌量相當(dāng)，差異無顯著性P=0．839；經(jīng)祛瘀消積湯及胃復(fù)春治療后，“胃痞血瘀積證”大鼠的總排酸量增加，祛瘀消積湯中劑量組對胃酸分泌的治療效果要優(yōu)于大劑量組、胃復(fù)春組、小劑量組。胃殘留量實驗?zāi)Ｐ徒M的

12、大鼠胃殘留量明顯高于正常對照組，差異具有顯著性P=0．000；經(jīng)祛瘀消積湯及胃復(fù)春治療后，胃殘留量顯著降低，與模型組相比，均P<0．01；祛瘀消積湯中劑量組與正常組相比，無顯著差異；而祛瘀消積湯大劑量組與正常組相比，差異具有顯著性P=0．000，大劑量組的大鼠胃排空功能增強；祛瘀消積小劑量組及胃復(fù)春組與正常組相比，胃排空功能不及正常組，差異具有顯著性。小腸推進實驗?zāi)Ｐ徒M大鼠的小腸推進率明顯低于正常對照組，差異具有顯著性P=0．000；經(jīng)

13、祛瘀消積湯及胃復(fù)春治療后，小腸推進率顯著增高，與模型組相比，均P〈0．05；祛瘀消積湯小劑量組、中劑量組及胃復(fù)春組與正常組相比，無顯著差異；而祛瘀消積湯大劑量組與正常組相比，差異具有顯著性P=0．017，大劑量組的大鼠胃腸推動功能亢進。胃重比模型組的大鼠胃重比明顯低于正常對照組，差異具有顯著性P=0．000；經(jīng)祛瘀消積湯及胃復(fù)春治療后，胃重比顯著增高，與模型組相比，均P〈0．01；但祛瘀消積湯及胃復(fù)春各治療組與正常對照組相比，差異均有顯

14、著性，較正常對照組低；而祛瘀消積湯與胃復(fù)春組相比，中劑量組對胃重的恢復(fù)要優(yōu)于胃復(fù)春，差異具有顯著性P=0．000。 胃黏膜肉眼觀察與其它各組相比，模型組胃體較小，胃黏膜蒼白，胃壁較薄，大部分胃黏膜皺襞走向紊亂，部分區(qū)域皺襞變淺或消失，胃血管顯露迂曲，表現(xiàn)血瘀積證之象。經(jīng)祛瘀消積湯治療后，胃體較模型組大，胃壁較厚，以大劑量組的變化最為明顯；黏膜表現(xiàn)桃紅色，有比較明顯的皺襞，從整體上看，各治療組的胃黏膜肉眼觀察比正常組差。

15、胃黏膜病理結(jié)果模型組的大鼠胃黏膜HE染色觀察，大多數(shù)表現(xiàn)出中重度萎縮、腸化生和異型增生。治療組的胃黏膜病理情況有明顯的改善，萎縮程度減輕，腸化生及異型增生減少，特別是中劑量組明顯。 血液生理檢查各組間大鼠的血常規(guī)及血脂比較無統(tǒng)計學(xué)差異，造模及中藥藥物對血常規(guī)及血脂無明顯影響。肝功能指標(biāo)中，間接膽紅素及血轉(zhuǎn)氨酶指標(biāo)，組間差異有顯著性，造模組的大鼠間接膽紅素和血轉(zhuǎn)氨酶升高，經(jīng)治療后大鼠肝功能均有改善。腎功能檢查中，血尿素氮指標(biāo)存在組

16、間差異，模型組大鼠血尿素氮升高，經(jīng)治療后，血尿素氮下降，但是與正常組相比仍有顯著性差異。血粘度檢查中，全血低切粘度和血漿粘度存在組間差異，造模后大鼠血粘度升高，經(jīng)治療后，血粘度下降，與正常組比較無顯著性差異。 主要結(jié)論: 1、MNNG綜合造模法是目前學(xué)者們公認(rèn)的、成熟穩(wěn)定、操作簡便、成功率高的造模方法。本實驗借鑒傳統(tǒng)造模方法，加45%酒精及雷尼替丁優(yōu)化組合，提高了造模效果。實驗組大鼠瘀紫的舌象、減弱的胃腸功能、胃黏膜病理

17、呈現(xiàn)中、重度萎縮并伴有中重度腸化生和異型增生等，從病、證兩方面提供資料，說明“胃痞血瘀積證”動物模型構(gòu)建成功。為中醫(yī)實驗研究慢性萎縮性胃炎癌前病變提供了新的動物模型，并創(chuàng)新了動物模型的建模方法，為研究人類慢性萎縮性胃炎疾病提供了較理想的動物模型。 2、“胃痞血瘀積證”符合慢性萎縮性胃炎病情，運用“祛瘀消積法”治療后，“胃痞血瘀積證”大鼠的舌象好轉(zhuǎn)，胃腸功能增強，胃黏膜有所恢復(fù)，表明“祛瘀消積湯”治療此型慢性萎縮性胃炎是有效的。而