三峽庫區(qū)耐淹植物內(nèi)生真菌多樣性及生物活性研究.pdf

1、所謂內(nèi)生真菌（f ungal endophytes），是指那些生活史的全部或者部分階段在健康的植物的組織、器官或者細(xì)胞間隙中的一類真菌[1]。它們雖然生存在植物的體內(nèi)，但是并不使植物表現(xiàn)出任何的病癥，或者暫時不會使植物表現(xiàn)出病癥[2,3]?？偲饋碚f，內(nèi)生真菌在微生物的多樣性中占有非常重要和積極的地位，它們普遍存在于各種各樣的植物中[4]。據(jù)報道，內(nèi)生真菌的種類大約有高達(dá)150萬種，而迄今為止，人們僅僅描述了大約6-7％的內(nèi)生真菌，還有大

2、量的內(nèi)生真菌等待著人們?nèi)ネ诰蚝脱芯縖5,6]。正是因為內(nèi)生真菌具有這么龐大的數(shù)量，所以它們在我們的科研中具有非常巨大的價值以及潛力。研究表明，內(nèi)生真菌具有抗病抑菌、抵抗病蟲害、增加農(nóng)作物的抗逆性、促進(jìn)植物的生長等作用，同時其次生代謝產(chǎn)物還具有抑制藻類生長、抑制病原菌生長等作用，而且在抗癌藥物的研發(fā)中也具有舉足輕重的作用[7]。正是基于以上原因，我們對三峽庫區(qū)的耐淹植物疏花水柏枝（Myricaria laxif lora）以及中華蚊母（D

3、istylium chinense）的內(nèi)生真菌進(jìn)行研究，并嘗試首次對中華蚊母體內(nèi)的內(nèi)生真菌進(jìn)行分離鑒定以及生物抗性篩選。我們將分離得到的內(nèi)生真菌進(jìn)行抗真菌以及抗藻實驗，以研究其內(nèi)生真菌對生態(tài)環(huán)境的影響。
　　我們分別從疏花水柏枝的根部以及莖部分離得到45株和46株內(nèi)生真菌，經(jīng)過形態(tài)學(xué)以及分子生物學(xué)鑒定分別將它們分為17以及11個形態(tài)屬。其中以糞殼菌綱，子囊菌綱以及座囊菌綱的菌為疏花水柏枝根部內(nèi)生真菌的優(yōu)勢種群。而莖部則是以細(xì)極鏈格

4、孢和鏈格孢為優(yōu)勢種群。我們分別從疏花水柏枝的根部以及莖部選取了30以及15株內(nèi)生真菌進(jìn)行體外對峙實驗、牛津杯實驗和抑藻實驗。從對峙結(jié)果可以看出，疏花水柏枝根部所選出的30株內(nèi)生真菌并不對大麗輪枝菌表現(xiàn)出拮抗作用，有11株內(nèi)生真菌對煙草炭疽病菌表現(xiàn)出拮抗作用，有5株對白菜黑斑病菌表現(xiàn)出拮抗作用，其中有1株內(nèi)生真菌表現(xiàn)出很強的拮抗作用，而對于粉紅色鐮刀菌，則有9株表現(xiàn)出拮抗作用，其中有3株表現(xiàn)出較強的拮抗作用。而莖部內(nèi)生真菌的拮抗結(jié)果則是，

5、5株對大麗輪枝菌表現(xiàn)出拮抗作用，7株對煙草炭疽病菌表現(xiàn)出拮抗作用，7株對白菜黑斑病菌表現(xiàn)出拮抗作用，3株對粉紅色鐮刀菌表現(xiàn)出拮抗作用。當(dāng)我們將得到的內(nèi)生真菌進(jìn)行液體培養(yǎng)，用其產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物對上述所使用的四種病原菌進(jìn)行牛津杯實驗時，很遺憾，無論是根部的內(nèi)生真菌還是莖部的內(nèi)生真菌的次生代謝產(chǎn)物均未對以上四種病原菌表現(xiàn)出抑制作用。與此同時，我們用內(nèi)生真菌的次生代謝產(chǎn)物進(jìn)行抑制銅綠微囊藻（Microcystis aeruginosa）實驗。

6、實驗結(jié)果表明，有20株內(nèi)生真菌的次生代謝產(chǎn)物對銅綠微囊藻具有不同程度的抑制作用，其中3株菌表現(xiàn)出很強的抑制作用，抑制率達(dá)到了50%~60%，3株次之，抑制率達(dá)到40%~50%，5株較強，抑制率達(dá)到20%~40%，其它則具有微弱的抑制作用。而對于莖部，有7株表現(xiàn)出對藻類的抑制，僅有1株表現(xiàn)出較強的抑制作用，抑制率達(dá)到47.7%，1株次之，為29.8%，其余的則為輕微的抑制作用。
　　我們從中華蚊母的根部和莖部分別得到了109和52株

7、內(nèi)生真菌，經(jīng)過形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定，他們分別屬于13以及11個分類屬。其中根部以擬莖點霉屬、炭角菌和新殼梭孢菌為優(yōu)勢菌群而莖部則以擬莖點霉屬和新殼梭孢菌為優(yōu)勢菌群。從體外對峙的結(jié)果來看從中華蚊母根部所挑選出的20株內(nèi)生真菌，有2株對大麗輪枝菌表現(xiàn)出拮抗作用，4株對煙草炭疽病菌表現(xiàn)出拮抗作用，7株對白菜黑斑病菌表現(xiàn)出拮抗作用，11株對粉紅色鐮刀菌表現(xiàn)出拮抗作用。而對于中華蚊母莖部的內(nèi)生真菌，則有2株對大麗輪枝菌表現(xiàn)出拮抗作用，5株對煙草

8、炭疽病菌表現(xiàn)出拮抗作用，3株對白菜黑斑病菌表現(xiàn)出拮抗作用，10株對粉紅色鐮刀菌表現(xiàn)出拮抗作用。與疏花水柏枝內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物的抑菌結(jié)果相同，中華蚊母內(nèi)生真菌的次生代謝產(chǎn)物也不具有抗菌性。然后，我們同樣用中華蚊母內(nèi)生真菌的發(fā)酵液對銅綠微囊藻進(jìn)行了處理。結(jié)果表明，中華蚊母根部的內(nèi)生真菌有14株對銅綠微囊藻表現(xiàn)出不同程度的抑制作用，其中3株表現(xiàn)出很強的抑制效果，抑制率達(dá)到了50~60%，其它13株的抑制效果則相對較弱。而對于中華蚊母莖部的內(nèi)