小麥-中間偃麥草抗黃矮病易位系的細(xì)胞與分子水平鑒定.pdf

1、本研究通過(guò)對(duì)抗黃矮病的小麥-中間偃麥草二體異代換系與普通小麥雜交的雜種經(jīng)幼胚愈傷組織培養(yǎng)誘導(dǎo)產(chǎn)生再生植株后代進(jìn)行抗性選擇和分子細(xì)胞學(xué)鑒定，獲得抗黃矮病的易位系，并篩選出與抗性連鎖的分子標(biāo)記，為該抗源在小麥育種計(jì)劃中的利用提供材料，并為分子標(biāo)記輔助選擇打下基礎(chǔ)。 1.以生物素標(biāo)記的中間偃麥草基因組DNA為探針，對(duì)抗黃矮病的小麥-中間偃麥草二體異代換系與普通小麥雜交的雜種經(jīng)幼胚愈傷組織培養(yǎng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的再生植株后代進(jìn)行原位雜交(GISH

2、)鑒定，篩選出兩個(gè)姐妹純合易位株系04Y5579-2和04Y5579-3，兩個(gè)材料均含有一對(duì)中間偃麥草染色體臂；以黑麥基因組DNA為探針的原位雜交表明：株系04Y5579-2染色體組成中含有黑麥的1RS染色體. 2.以小麥第二同源群上的SSR引物，對(duì)易位株系04Y5579-2和04Y5579-3以及其親本進(jìn)行擴(kuò)增，結(jié)果表明：2A，2B染色體上和2D長(zhǎng)臂上的引物在易位系中擴(kuò)增出與小麥親本相同的片段，2DS上的引物在易位株系04Y5

3、579-2和04Y5579—3中均不能擴(kuò)增出與小麥親本相同的目的片段，說(shuō)明兩個(gè)易位株系缺失了小麥染色體的2D短臂。 3.以小麥第二同源群上的RFLP探針的DNA序列和網(wǎng)上公布的小麥第二同源群上的EST序列為模板，共轉(zhuǎn)化設(shè)計(jì)30對(duì)PCR引物對(duì)易位株系、小麥親本和含有2Ai-2染色體的抗黃矮病材料包括中間偃麥草、二體附加系Z6，二體代換系N439、N420、N431、N452進(jìn)行擴(kuò)增。共篩選出5對(duì)引物可以在小麥親本和易位株系間擴(kuò)增出

4、差異片段。其中，基于小麥第二同源群染色體短臂上的RFLP探針的DNA序列和EST序列設(shè)計(jì)的引物PSR126、PSR131、ESTBQ171983可以在含有中間偃麥草2Ai-2染色體的抗病材料包括兩個(gè)易位株系中比普通小麥親本多擴(kuò)增出一條中間偃麥草2Ai-2染色體的特異片段，而基于第二同源群染色休長(zhǎng)臂上的RFLP探針的DNA序列和EST序列設(shè)計(jì)的的引物PSR112F和ESTBE445884，只可以在中間偃麥草，二體附加系Z6，二體代換系N4