與系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者皮膚損害有關(guān)的血清抗體的研究.pdf

1、研究背景和目的:
　　 系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是一種以T淋巴細(xì)胞功能異常、B淋巴細(xì)胞高度活化、抗核抗體等多種自身抗體大量產(chǎn)生為特征的自身免疫性疾病，可導(dǎo)致多器官、多系統(tǒng)受累。皮膚損害是SLE最常見的臨床表現(xiàn)之一，往往是促成SLE患者就診的首要原因，同時也是最有提示意義的臨床診斷依據(jù)。皮膚是系統(tǒng)性紅斑狼瘡最主要的受累器官，但其損傷的機(jī)理尚不清楚，國內(nèi)外相關(guān)研究還很薄弱。通

2、過對系統(tǒng)性紅斑狼瘡腎臟損傷機(jī)制的研究，學(xué)者們認(rèn)為SLE靶器官的損傷主要是由抗原抗體反應(yīng)介導(dǎo)的一種免疫性損害。鑒于此，有學(xué)者探討了目前已知的SLE系列自身抗體在皮損發(fā)生中的作用，結(jié)果未能明確這些抗體是否參與了皮膚損害。因此，我們推測，在SLE患者血清中存在能與皮膚蛋白結(jié)合的抗體，這種或這些抗體可能與已知的SLE系列自身抗體不同，通過識別并與皮膚自身抗原結(jié)合，引起皮膚損傷。
　　 為此，本課題擬從以下幾個方面進(jìn)行研究：觀察SLE患者

3、血清與表皮及全層皮膚中提取的蛋白質(zhì)結(jié)合情況；分析血清中能與皮膚蛋白結(jié)合的抗體的存在與皮膚損害的關(guān)系；分析檢測到的抗體與其他已知SLE系列自身抗體的關(guān)系；分析檢測到的抗體與SLE其他組織損傷的關(guān)系。
　　 本課題探討了與SLE患者皮膚損害有關(guān)的血清抗體，對于闡明系統(tǒng)性紅斑狼瘡皮膚損害的發(fā)生機(jī)理具有重要意義。同時，對SLE進(jìn)行早期診斷和治療提供科學(xué)依據(jù)。
　　 材料方法:
　　 1.研究對象
　　 實驗組入選

4、的36例SLE患者均符合1997年修訂的美國風(fēng)濕學(xué)會的SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)。其中有皮損的31例，無皮損的5例；對照組包括正常人3例、大皰性皮膚病患者3例、皮肌炎患者3例。
　　 2.血清收集
　　 抽取受試對象晨起空腹?fàn)顟B(tài)靜脈血5ml，置于干燥管中，離心，3000 r/min，15min，吸取上層血清，分裝，-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br>　　 3.皮膚標(biāo)本來源
　　 所有皮膚標(biāo)本均來自于我院泌尿外科手術(shù)室切除的正常包

5、皮。
　　 4.皮膚蛋白質(zhì)提取
　　 收集到的皮膚組織一部分直接提取全層皮膚的蛋白質(zhì)，另一部分采用鹽析裂解的方法得到表皮，提取蛋白質(zhì)。采用BCA法測定蛋白質(zhì)濃度。
　　 5.免疫印跡實驗
　　 制備SDS-PAGE凝膠，加入皮膚蛋白樣品，以合適的電壓，進(jìn)行電泳，然后電轉(zhuǎn)，將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，用牛血清白蛋白封閉1小時，結(jié)合受試者的血清1小時，結(jié)合二抗(辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗人IgG抗體)1小時，最后

6、顯色，觀察結(jié)果。
　　 6.統(tǒng)計分析
　　 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包分析實驗數(shù)據(jù)。實驗中定性資料的分析采用卡方檢驗，定量資料的分析用t檢驗。顯著性水準(zhǔn)0.05。
　　 結(jié)果:
　　 1.SLE患者血清抗體和皮膚蛋白結(jié)合情況
　　 31例有皮損的SLE患者，血清中能與皮膚蛋白發(fā)生結(jié)合的有28例，未結(jié)合的僅有3例；5例無皮損的SLE患者，血清中能與皮膚蛋白結(jié)合的有3例，未能結(jié)合的有2例。

7、　　 SLE患者血清能識別的皮膚蛋白分子量從5kd到190kd不等，其中以識別分子量為35kd，30kd，23kd的皮膚蛋白為主，能識別35kd蛋白的有11例，能識別30kd蛋白的有19例，能識別23kd蛋白的有18例。
　　 2.識別皮膚蛋白的抗體與目前已知SLE自身抗體的比較
　　 將檢測到的抗體與目前已知的SLE自身抗體進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析發(fā)現(xiàn)：識別35kd的抗體與抗SSB抗體有關(guān)(P＜0.05)，識別30kd的抗體與

8、抗RNP抗體有關(guān)(P＜0.05)，識別23kd的抗體與抗ds-DNA抗體有關(guān)(P＜0.05)。
　　 3.識別皮膚蛋白的抗體與其他臨床表現(xiàn)的關(guān)系
　　 檢測到的抗體與SLE患者腎臟損害、關(guān)節(jié)癥狀和血液系統(tǒng)損害有關(guān)(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.SLE患者血清中存在與正常皮膚蛋白結(jié)合的抗體，其主要靶抗原分子量為35kd、30kd、23kd。
　　 2.檢測到的抗體不同于目前已知的SLE系