可溶性表氧化物水解酶在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化病變中的表達(dá)及其意義.pdf

1、動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是危害人類健康的常見(jiàn)病,其中由冠狀動(dòng)脈粥樣硬化引起的心肌梗塞是AS中對(duì)人類構(gòu)成威脅最大的疾病。血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)的增殖和遷移在AS病變形成中起重要作用,其表型轉(zhuǎn)化是細(xì)胞增殖和遷移的先決條件。表氧-二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acids,EETs)是花生四烯酸經(jīng)P450通路的代謝產(chǎn)物,被認(rèn)為是內(nèi)皮衍

2、生性超極化因子,可使血管平滑肌細(xì)胞超極化,從而誘導(dǎo)冠狀動(dòng)脈舒張并降低黏附因子的表達(dá)。因此,EETs被認(rèn)為是一種內(nèi)源性預(yù)防高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化等血管病變的保護(hù)因子?？扇苄员硌趸锼饷?soluble epoxide hydrolase,sEH)可將EETs水解轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)二羥基衍生物二羥-二十碳三烯酸,使EETs喪失其血管保護(hù)的生物活性。有研究報(bào)道,在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,sEH抑制劑可以減緩AS斑塊的發(fā)展,但是sEH在人類AS發(fā)展過(guò)程中的表達(dá)變化

3、及其機(jī)制尚不清楚。本課題旨在揭示sEH在人冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中的表達(dá)及其機(jī)制,為動(dòng)脈粥樣硬化的治療提供新的潛在性靶點(diǎn),為sEH抑制劑臨床應(yīng)用的可行性提供理論基礎(chǔ)。
　　首先,我們收集2001-2010年汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室法醫(yī)病理尸檢的人冠狀動(dòng)脈97例,其中有冠狀動(dòng)脈粥樣硬化病變者61例,對(duì)照組36例。通過(guò)蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色,根據(jù)冠脈管腔狹窄程度,將病變程度分成Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)、III級(jí)

4、和Ⅳ級(jí)。通過(guò)sEH,SMα-actin和CD68等免疫組化和麗春紅/維多利亞藍(lán)(Ponceau/Victoria blue,P/VB)染色發(fā)現(xiàn):在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的中膜層和增生內(nèi)膜層sEH蛋白水平的表達(dá)較正常組增高。其中,增生內(nèi)膜層中sEH表達(dá)主要集中在病變?cè)缙诘蘑窦?jí)或Ⅱ級(jí)標(biāo)本的向內(nèi)膜遷移的VSMC,提示冠脈VSMC中sEH表達(dá)增高,可能在AS的早期病變中發(fā)揮一定作用。
　　為了在細(xì)胞水平驗(yàn)證以上假說(shuō),我們以不同濃度的血小板源

5、性生長(zhǎng)因子(PDGF-BB)刺激培養(yǎng)的原代大鼠動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞,通過(guò)蛋白電泳免疫印跡分析發(fā)現(xiàn)PDGF-BB劑量依賴性增加sEH的表達(dá)。同時(shí)PDGF-BB下調(diào)VSMC分化型細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化標(biāo)志物SMα-actin、SM22α和Cnn1的表達(dá),該作用可被特異性sEH抑制劑TUPS部分抑制。采用sEH腺病毒(Ad-sEH)在VSMC中過(guò)表達(dá)sEH的結(jié)果發(fā)現(xiàn):Ad-sEH轉(zhuǎn)染VSMC48小時(shí)后,sEH蛋白表達(dá)明顯增加,同時(shí)伴隨VSMC表型轉(zhuǎn)化的標(biāo)志物

6、的改變。進(jìn)一步,Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示PDGF-BB處理及Ad-sEH感染的VSMC細(xì)胞遷移數(shù)目明顯增多,而TUPS可部分抑制由PDGF-BB引起的細(xì)胞遷移。
　　進(jìn)一步在體動(dòng)物試驗(yàn)中,我們通過(guò)導(dǎo)絲拉傷小鼠左頸總動(dòng)脈建立頸動(dòng)脈內(nèi)膜損傷模型,并用sEH抑制劑TUPS干預(yù)sEH的生物學(xué)活性,觀察內(nèi)膜增生程度。內(nèi)膜損傷術(shù)后2周,分離左、右頸總動(dòng)脈,進(jìn)行免疫熒光雙重染色。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在sEH+/+組的C57對(duì)照小鼠中,左頸動(dòng)

7、脈較右頸總動(dòng)脈管壁增厚顯著增加(16.64±1.24μm/11.58±0.67μm,P<0.001),并有輕度的內(nèi)膜增生;同時(shí)血管平滑肌層中sEH表達(dá)明顯增高;而TUPS組和sEH-/-組動(dòng)脈管壁增厚程度明顯減輕(13.67±0.86μm,P=0.001;11.62±0.99μm,P<0.001)。
　　本研究首次發(fā)現(xiàn),在人冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中的中膜層和增生內(nèi)膜層VSMC中sEH蛋白水平的表達(dá)增高。而增生內(nèi)膜層sEH表達(dá)主要集中