重組pEGFP-N1-CD146表達(dá)載體的構(gòu)建及其對MDA-MB-231細(xì)胞侵襲、凋亡的影響.pdf

1、目的:構(gòu)建人類CD146基因的表達(dá)載體,研究其對乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231細(xì)胞侵襲、凋亡的影響。
　　 方法:采用分子生物學(xué)方法構(gòu)建人類CD146基因的表達(dá)載體,利用脂質(zhì)體Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染到乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231,于熒光顯微鏡下評價(jià)轉(zhuǎn)染效果,利用RT-PCR、Westernblot分別檢測基因CD146在mRNA、蛋白水平上的表達(dá)效果。采用MTT法檢測細(xì)胞在體外增殖的能力;流式細(xì)胞儀法FCM檢測

2、細(xì)胞的周期分布及凋亡水平的變化情況;Transwell實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞侵襲能力改變。
　　 結(jié)果:酶切、測序結(jié)果均表明pEGFP-N1-CD146載體構(gòu)建成功;RT-PCR、Westernblot結(jié)果顯示,與對照組相比,轉(zhuǎn)染細(xì)胞后,實(shí)驗(yàn)組CD146mRNA和蛋白的水平表達(dá)均有增高(P＜0.05);增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染后實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增值能力較對照組細(xì)胞增高(P＜0.05);流式結(jié)果表明,與對照組相比,pEGFP-N1-CD146實(shí)驗(yàn)組細(xì)