龜版提取物對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖過(guò)程中核受體的影響.pdf

1、研究目的 核受體是配體依賴(lài)性轉(zhuǎn)錄因子超家族，核受體的配體作用幾乎包含了生物體發(fā)育、維持自身穩(wěn)態(tài)、細(xì)胞分裂、分化等所有基本生命過(guò)程。核受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄活化機(jī)制的研究是近十年生物學(xué)研究的熱點(diǎn)，繼G蛋白耦聯(lián)受體和離子通道之后，核受體已成為第三大類(lèi)非酶性治療靶點(diǎn)。前期工作發(fā)現(xiàn)龜版在體內(nèi)、外可以促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymalstemcells，MSCs)的增殖并誘導(dǎo)MSCs分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞，經(jīng)過(guò)較長(zhǎng)時(shí)間誘導(dǎo)后MSC還可能向成

2、骨方向分化。本研究根據(jù)中醫(yī)“腎藏精，主發(fā)育”的理論，在既往研究的基礎(chǔ)上，觀察龜版提取物對(duì)MSCs增殖過(guò)程中視黃酸受體(retinoicacidreceptor-α，RARα)、維生素D受體(vitaminDreceptor，VDR)、糖皮質(zhì)激素受體(glucocorticoidreceptor，GR)、雌激素受體(estrogenreceptor，ER)、甲狀腺激素受體(thyroidhormonereceptor-α，TRα)和過(guò)氧化

3、物酶體增殖物活化受體(peroxisomeproliferatoractinatedreceptor-δ，PPARδ)表達(dá)的影響，從基因水平探討中藥龜版補(bǔ)腎填精的作用機(jī)制，進(jìn)一步篩選龜版提取物和作用藥理靶點(diǎn)，為龜版提取物的開(kāi)發(fā)與臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 研究方法 使用密度梯度法分離大鼠MSCs進(jìn)行培養(yǎng)，經(jīng)5-溴脫氧尿嘧啶標(biāo)記和CD44免疫組化染色鑒定后，將體外培養(yǎng)的MSCs分為空白對(duì)照組、龜版低劑量組、龜版中劑量組、龜版高

4、劑量組，加入不同濃度的龜版提取物，分別于龜版提取物作用12h、24h、72h、120h后，用免疫組化法和免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)MSCs的RARα、VDR、GR、ER、TRα、PPARδ的表達(dá)。 研究成果 1.龜版提取物作用的各組MSCs的RARα、VDR表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞均顯著高于對(duì)照組，且呈劑量依賴(lài)性；作用24h后RARα表達(dá)達(dá)峰值，作用72h后VDR表達(dá)達(dá)峰值。 2.龜版提取物作用的各組MSCs增殖過(guò)程中，用免疫組