二倍體半枝蓮愈傷組織誘導(dǎo)與繼代培養(yǎng)研究.pdf

1、本研究以二倍體半枝蓮（Scutellaria barbata D.Don.）莖段作外植體誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織，初步探討了不同光照條件、生長素、細(xì)胞分裂素、赤霉素和精胺等因素對半枝蓮愈傷組織誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)及黃酮類化合物積累的影響，為半枝蓮進(jìn)行進(jìn)一步懸浮培養(yǎng)提供了實(shí)驗(yàn)的可行性，為優(yōu)化提高總黃酮含量的生產(chǎn)體系奠定了技術(shù)實(shí)踐基礎(chǔ)。取得的主要研究成果如下:
　　(1)在探究光照條件（黑暗4周、黑暗2周+光照2周、光照4周）對二倍體半枝蓮愈傷組織

2、誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)中，光照（16 h/8 h光周期培養(yǎng)4周）條件下，對照組測得的愈傷組織誘導(dǎo)率為0，總黃酮含量為0.107％;當(dāng)NAA和6-BA濃度分別為0.0080 mmol/L和0.0090 mmol/L時(shí)，測得的愈傷組織誘導(dǎo)率為96.67％，總黃酮含量為3.064％，且總黃酮含量為最高值。在此條件下，愈傷組織顏色呈黃綠色，質(zhì)地疏松，含水量較大，無褐化現(xiàn)象產(chǎn)生。相對于光照2周+黑暗2周交替處理和黑暗4周條件下，愈傷組織的長勢更好，總黃酮含量更

3、高。
　　(2)在探究不同生長素和細(xì)胞分裂素組合處理對愈傷組織誘導(dǎo)影響實(shí)驗(yàn)中:①2，4-D和6-BA濃度為0.0070 mmol/L和0.0025 mmol/L時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率為79.17％，總黃酮含量最高為3.096％;對照組誘導(dǎo)率為0，總黃酮含量為0.194％。②IBA和6-BA濃度為0.0025 mmol/L2，4-D和0 mmol/L時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率為41.67％，總黃酮含量最高為2.639％;對照組誘導(dǎo)率為0，總黃酮

4、含量為1.367％。③IBA和KT組合處理時(shí)，誘導(dǎo)率均為0，總黃酮含量最高值是2.981％(0.0045 mmol/L KT+0 mmol/L IBA);對照組誘導(dǎo)率為0，總黃酮含量為2.212％。④IBA和TDZ濃度分別為0 mmol/L和0.0045 mmol/L時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率為70.83％，總黃酮含量最高為3.056％;對照組誘導(dǎo)率為0，總黃酮含量為0.827％。⑤2，4-D和KT濃度為0.0045 mmol/L和0.0045

5、 mmol/L時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率為41.67％，總黃酮含量最高為3.070％;對照組誘導(dǎo)率為0，總黃酮含量為0.925％。⑥2，4-D和TDZ濃度為0.0065 mmol/L和0.0065 mmol/L時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率為91.67％，而總黃酮含量最高為2.931％;對照組誘導(dǎo)率為0，總黃酮含量為0.410％。⑦NAA和TDZ濃度為0.0080 mmol/L和0.0025 mmol/L時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率為95.83％，總黃酮含量最高為3

6、.402％;對照組誘導(dǎo)率為0，總黃酮含量為1.275％。⑧NAA和KT濃度為0.0080 mmol/L和0.0025 mmol/L時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率為41.67％，總黃酮含量最高為2.873％;對照組誘導(dǎo)率為0，總黃酮含量為1.876％。將NAA(0.0080 mmol/L)和6-BA(0.0090 mmol/L)激素組合處理組合作為繼代培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基。
　　(3)在探究赤霉素或者精胺對半枝蓮愈傷組織誘導(dǎo)的影響實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)赤霉素濃

7、度為0.005 mmol/L，誘導(dǎo)率最高為100.00％，總黃酮含量最高為3.332％，且愈傷組織長勢最好。當(dāng)精胺濃度為0.5 mmol/L時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率為93.33％，而總黃酮含量最高為3.086％。表明精胺在半枝蓮愈傷組織誘導(dǎo)方面沒有明顯的促進(jìn)作用，各處理組之間的黃酮含量無顯著性差異。
　　(4)本研究比較了二倍體半枝蓮和秋水仙素誘導(dǎo)的四倍體半枝蓮愈傷組織中總黃酮成分含量方面的差異性。在NAA和6-BA組合處理下，二倍體和

8、四倍體半枝蓮的愈傷組織誘導(dǎo)率都達(dá)到最高值，分別是96.67％和97.92％;在NAA和TDZ組合處理下，二倍體半枝蓮的愈傷組織總黃酮含量達(dá)到最高為3.402％;在IBA和TDZ組合處理下，四倍體半枝蓮的愈傷組織總黃酮含量達(dá)到最高為5.622％;結(jié)果表明，四倍體半枝蓮愈傷組織總黃酮含量普遍高于二倍體半枝蓮。
　　(5)利用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)探究NAA、6-BA和TDZ三種激素組合處理對半枝蓮愈傷組織繼代培養(yǎng)影響實(shí)驗(yàn)中，促進(jìn)愈傷組織生長的激