二惡英暴露對在位子宮內膜組織中轉化生長因子β2、孕激素受體以及基質金屬蛋白酶-3和基質金屬蛋白酶-7表達影響的實驗研究.pdf

1、目的：近年來子宮內膜異位癥(endometriosis，EMs)發(fā)病率逐漸增高，但其發(fā)病機制尚未完全闡明。目前有研究表明二惡英與EMs的發(fā)病有關系，但其促進子宮內膜異位癥發(fā)生發(fā)展的機制尚未闡明，有研究提示二惡英可能通過影響在位子宮內膜組織正常的生物功能而誘發(fā)EMs的產生，胎兒期的二惡英暴露有可能增加成年期的患病風險，且二惡英的持續(xù)暴露可能促進EMs的發(fā)展。尚有研究報道TGF-β2、PR、MMP-3及MMP-7在維持正常的子宮內膜生物功能

2、中發(fā)揮重要作用，本研究旨在檢測不同時期不同劑量的二惡英暴露小鼠在子宮內膜異位癥模型狀態(tài)下在位子宮內膜組織轉化生長因子β2(transforming growth factor，TGF-β2)，孕激素受體(progesterone receptor，PR)以及基質金屬蛋白酶-3(matrixmetalloproteinase，MMP-3)和基質金屬蛋白酶-7(matrix metalloproteinase，MMP-7)表達，以探討TCD

3、D對子宮內膜異位癥(endometriosis，EMs)發(fā)病的影響及其機制。
　　 方法：
　　 1、動物模型的建立
　　 選擇60只已孕無特殊病原體(specific pathogen free，SPF)級C57BL/6小鼠，其雌性子代在其不同的發(fā)育階段(包括胎兒期，青春期，成年期)給予TCDD暴露，分為五組0/0，0/3，3/0，3/3，3/10(對照組，青春期+成年期暴露組，胎兒期+成年期暴露組，胎兒期+青

4、春期+成年期暴露組，胎兒期+青春期+成年期高劑量暴露組)。并且在其生后第70天采用小鼠自體子宮內膜移植法建立小鼠子宮內膜異位癥模型。術后3、6、9周各暴露一次TCDD3ug/kg。
　　 2、后期指標的檢測
　　 建模術后12周將所有處理組的小鼠脫臼處死，取其在位子宮內膜組織，用免疫組化PV法和Western-blot方法檢測TGF-β2、PR、MMP-3和MMP-7的表達并進行比較。
　　 3、所有數(shù)據(jù)采用SP

5、SS13.0軟件進行統(tǒng)計學分析。計量資料以x±s表示，采用多個均數(shù)比較的方差分析，計數(shù)資料采用X2檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結果：
　　 1、各組小鼠造模成功率的比較，采用行×列表的X2檢驗，對組間比較有顯著差異的數(shù)據(jù)進行多個樣本率間的多重比較。
　　 數(shù)據(jù)統(tǒng)計結果顯示各組間皮下種植成功率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，各組間腹膜種植成功率差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)組間兩兩比較結果顯

6、示3/3組種植成功率顯著高于0/0組(P<0.00625)。各組間卵巢部位異位種植成功率無顯著差異(P>0.05)。0/0組中皮下、腹膜及卵巢異位種植成功率無顯著差異(P>0.05)，0/3組中不同部位的異位種植成功率有顯著差異(P<0.05)，不同部位兩兩比較發(fā)現(xiàn)皮下和腹膜，腹膜和卵巢部位的異位種植成功率無顯著差異(P>0.0125；P<0.0125)，卵巢的異位種植成功率顯著高于皮下(P<0.0125)。3/0組中皮下、腹膜及卵巢異

7、位種植成功率具有顯著性差異(P<0.05)經過組內不同部位種植成功率的兩兩比較發(fā)現(xiàn)皮下和腹膜的異位種植成功率無顯著差異(P>0.0125)，皮下和卵巢的異位種植成功率有顯著差異(P<0.0125)，腹膜和卵巢的異位種植成功率無顯著差異(P>0.0125)3/3組中皮下、腹膜及卵巢部位的種植成功率有顯著差異(P<0.05)，各部位種植成功率兩兩比較顯示皮下與腹膜，腹膜與卵巢種植成功率無顯著差異(P>0.0125；P>0.0125)，卵巢部

8、位種植成功率顯著高于皮下種植成功率(P<0.0125)，3/10組中皮下、腹膜及卵巢異位種植成功率有顯著差異(P<0.05)，各部位兩兩比較顯示皮下與腹膜，腹膜與卵巢的異位種植成功率無顯著差異(P>0.0125；P>0.0125)，卵巢部位的異位種植成功率顯著高于皮下種植成功率(P<0.0125)。研究還發(fā)現(xiàn)隨暴露劑量的增加異位灶外觀由小囊泡發(fā)展為大囊泡，內有大量液體積聚，表面張力較大腹腔組織粘連嚴重。(見附圖2)
　　 2、各

9、組小鼠在位子宮內膜中TGF-β2和PR的表達，兩個指標在各組中的數(shù)據(jù)經方差齊性檢驗，符合方差分析的條件，采用完全隨機設計資料的方差分析，各組數(shù)據(jù)經比較有顯著差異的進行多個樣本均數(shù)間的多重比較，采用LSD-t檢驗。
　　 PR及TGF-p2在0/0組與0/3組中的表達經比較無顯著性差異(P>0.05，P>0.05)，PR及TGF-β2在0/0組與3/0組的表達經比較無顯著性差異(P>0.05，P>0.05)，PR及TGF-β2在0

10、/0組與3/3組的表達經比較具有顯著性差異，(P<0.05，P<0.05)。其在3/10組中的表達低于3/3組中的表達，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 3、各組小鼠在位子宮內膜中MMP-3及MM-7的表達，兩個指標在各組中的數(shù)據(jù)經方差齊性檢驗，符合方差分析的條件，采用完全隨機設計資料的方差分析，各組數(shù)據(jù)經比較有顯著差異的進行多個樣本均數(shù)間的多重比較，采用LSD-t檢驗。
　　 MMP-3及MMP-7在0/0組與

11、0/3組中的表達經比較差異無統(tǒng)計意義(P>0.05，P>0.05)。MMP-3及MMP-7在0/0組與3/0組中的表達經比較差異無統(tǒng)計意義(P>0.05，P>0.05)。MMP-3及MMP-7在0/0組中的表達顯著低于3/3組及3/10組中的表達(P<0.05，P<0.05)，其在3/10組中的表達高于3/3組中的表達，差異有統(tǒng)計學意義((P<0.05，P<0.05)。
　　 結論：
　　 1、在不同時期及不同劑量的TC

12、DD暴露組小鼠進行皮下、腹膜及卵巢部位的異位內膜種植后，3/3組(胎兒期+青春期+成年期普通劑量暴露組)的腹膜種植成功率明顯高于0/0組(對照組即未暴露組)。在各個TCDD暴露組，與對照組不同的是卵巢部位的異位內膜種植成功率明顯高于皮下種植的成功率。說明TCDD暴露可促進異位內膜的種植。
　　 2、3/10組(胎兒期+青春期+成年期高劑量TCDD暴露組)小鼠在位內膜組織中TGF-β2和PR的表達明顯低于3/3組(胎兒期+青春期+

13、成年期普通劑量暴露組)，而3/3組表達又明顯低于0/0組(即對照組)，說明TCDD可下調在位內膜組織中TGF-β2和PR的表達，且下調作用隨劑量的增加而逐漸增強。
　　 3、3/10組(胎兒期+青春期+成年期高劑量TCDD暴露組)小鼠在位內膜組織中MMP-3和MMP-7的表達明顯高于3/3組(胎兒期+青春期+成年期普通劑量暴露組)，而3/3組表達又明顯高于0/0組(即對照組)，說明TCDD可上調在位內膜組織中MMP-3和MMP-