內(nèi)源性大麻素在癲癇發(fā)生中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:早期干擾內(nèi)源性大麻素2-花生四烯酸甘油(2-arachidonylglycerol,2-AG)代謝,觀察其對(duì)匹魯卡品(pilocarpine,Pilo)致癇小鼠慢性自發(fā)性發(fā)作、行為學(xué)及組織學(xué)的影響,進(jìn)一步了解內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)在癲癇發(fā)生中的作用。
　　方法:①造模:健康雄性C57/BJ小鼠,少量多次腹腔注射匹魯卡品誘發(fā)按修訂后Racine法分級(jí)的4.5級(jí)以上無(wú)明顯間歇的癲癇持續(xù)狀態(tài)(statusepilepticus,SE),

2、持續(xù)70分鐘后腹腔注射地西泮終止發(fā)作,終止并存活視為造模成功。將造模成功的小鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組(生理鹽水,2次/d),RHC-80267對(duì)照組(生理鹽水,1次/d),JZL-184組(20mg/kg,2次/d),RHC-80267組(1.3mmol,1次/d),每組15只。RHC處理及對(duì)照組通過(guò)側(cè)腦室注射給藥,每次1μl;JZL處理及對(duì)照組按10ml/kg腹腔給藥;空白對(duì)照組5只,給予腹腔等量生理鹽水注射。SE終止后立即給藥,連續(xù)給藥

3、7天;②造模前半小時(shí)開(kāi)始視頻腦電監(jiān)測(cè),每天12h,持續(xù)至自發(fā)性發(fā)作出現(xiàn)后30天,觀察自發(fā)性發(fā)作形成的頻率、比率、持續(xù)時(shí)間及發(fā)作等級(jí),并分析各組間有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;③視頻監(jiān)測(cè)完畢后,依次對(duì)動(dòng)物進(jìn)行情感及認(rèn)知相關(guān)的行為學(xué)實(shí)驗(yàn),觀察小鼠多項(xiàng)行為功能變化;④通過(guò)Nissl染色觀察海馬CA1、CA3區(qū)和齒狀回神經(jīng)元的丟失情況,并利用統(tǒng)計(jì)軟件分析各實(shí)驗(yàn)組數(shù)據(jù)。
　　結(jié)果:①在4-5次匹魯卡品注射期間,小鼠依次出現(xiàn)外周膽堿能反應(yīng)、1-4級(jí)發(fā)作和4

4、.5級(jí)以上無(wú)明顯間歇的連續(xù)發(fā)作,即為SE。模型成功率為76.7％。與模型組相比,RHC處理組自發(fā)性發(fā)作的發(fā)生比率和持續(xù)時(shí)間有所減少(P<0.05),其發(fā)生頻率有降低趨勢(shì),但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),發(fā)作程度與模型組無(wú)差異(P>0.05);JZL處理組可見(jiàn)明顯增加的發(fā)作頻率,但對(duì)其他指標(biāo)無(wú)明顯影響(P>0.05);正常對(duì)照組無(wú)癇性發(fā)作;②RHC處理未能減少癲癇動(dòng)物無(wú)目的的探索行為,但可改善其焦慮、抑郁狀態(tài),提高學(xué)習(xí)、記憶能力(P<

5、0.05);JZL處理可明顯降低動(dòng)物的自主活動(dòng)能力和探索行為,加重其焦慮及抑郁狀態(tài),有降低動(dòng)物學(xué)習(xí)、記憶能力的趨勢(shì),但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);③SE后第7周模型組海馬CA1、CA3區(qū)和齒狀回神經(jīng)元均有丟失,且排列紊亂,尼氏體含量減少甚至消失,以CA1和CA3區(qū)較明顯;RHC處理組神經(jīng)元損傷程度明顯減少,以CA1區(qū)最明顯(P<0.05);JZL處理組CA1及CA3區(qū)神經(jīng)元損傷程度均較高,與模型組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。