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文檔簡介
1、目的：為了評估中南大學生殖與干細胞研究所自主建立的人胚胎干細胞系的質量，如多能性、自我更新的能力及多向分化潛能，并分析與巨核細胞-紅細胞分化相關的關鍵轉錄因子RUNX-1、GATA-1、FOG-1和KLF-1的表達模式。
方法：chHES-8,chHES-22,chHES-26,chHES-51,chHES-55,chHES-60,chHES-137,chHES-254,chHES-268,chHES-281,chHES-
2、282,chHES-283，chHES-284均在鼠飼養(yǎng)層細胞上培養(yǎng)，對所有細胞系進行胚胎干細胞特異性標記的免疫熒光染色、端粒酶活性檢測和核型分析。 3、> 為了排除MEFs對轉錄因子和基因表達檢測結果的干擾，hESCs在無飼養(yǎng)層條件下mTeSR培養(yǎng)3-4天，收集細胞抽提RNA，RT-PCR檢測多能性相關基因的表達。 4、型，46，XY或46，XX。hESC體外自發(fā)分化3周后進行免疫熒光染色，表達三胚層標記β-tubulin-Ⅲ，SMA和AFP。hESC在體內形成的畸胎瘤H&E染色，染色結果可見來自三胚層的組織結構，神經管、軟骨和腺上皮。巨核細胞-紅細胞發(fā)育相關的關鍵轉錄因子FOG-1，GATA-1，KLF-1，F(xiàn)LI-1，Runx-1在不同細胞系的表達有差異。 5、-137高表達FLI-1和FOG-1。chHES-8只表達FLI-1。所有細胞系均低表達或不表達RUNX-1和GATA-1。除了chHES-281和chHES-284，其它細胞系均低表達或不表達KLF-1。
為了檢測hESCs的分化能力，體外分化采用懸浮不添加bFGF的體系進行hESCs自發(fā)分化，三周后進行三胚層標記的免疫熒光染色。體內分化采用將hESCs注射至8周齡重癥聯(lián)合免疫缺陷小鼠(SCID)大腿肌肉，8周后取出畸胎瘤進行H&E染色，染色結果可見來自三胚層的組織結構。
結果：hESC表達胚胎干細胞標記AKP,SSEA-3，SSEA-4，TRA-1-60，TRA-1-81和OCT-4。所有細胞系均高表達多能性相關基因OCT3/4、NANOG、SOX2、TERF1、THY-1、REX-1和LEFTA。G顯帶分析均顯示正常核
chHES-281和chHES-284高表達KLF-1和FOG-1。chHES
結論：
1.所有hESC細胞系均表達干細胞相關標記，具有自我更新和多向分化潛能。
2.巨核細胞-紅細胞發(fā)育特異性轉錄因子在不同hESC細胞系表達有差異。
3.部分hESC細胞系
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