GABA-,B-受體VFT區(qū)相互作用及其對受體激活的影響.pdf

1、γ－氨基丁酸(gamma aminobutyric acid，GABA)是腦內(nèi)主要的抑制性氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)，通過與GABA受體結(jié)合而發(fā)揮其生物學(xué)功能。在神經(jīng)細胞中存在兩類GABA的受體，其中代謝型γ－氨基丁酸受體GABAB受體（metabotropic GABA receptor type B，GABABR）屬于G蛋白偶聯(lián)受體(G-protein coupled receptor，GPCR)，介導(dǎo)慢速長時的突觸抑制效應(yīng)，并參與很多重要的

2、生理進程。一些中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病如癲癇的病理進程都與該受體有關(guān)。GABAB受體的激活在體內(nèi)受到非常精密的調(diào)控，過度激活或抑制都會引起各種神經(jīng)紊亂性疾病，因此，研究GABAB受體間的調(diào)控機制以及激活過程，在神經(jīng)科學(xué)基礎(chǔ)理論研究和臨床治療上都具有十分重要的應(yīng)用價值。 本研究基于GABAB受體GB1亞基的VFT區(qū)LB1的α螺旋結(jié)構(gòu)，通過點突變的方法構(gòu)建8個糖基化突變體，并在HEK293細胞水平檢測糖基化對受體激活的影響，闡明了VFT區(qū)L

3、B1之間的作用方式以及對整個受體激活過程的影響，初步揭示了GB1VFT的LB1區(qū)域?qū)τ谑荏w激活的作用以及GABAB受體激活精細過程的分子機制。 通過分子生物學(xué)檢測，8個GB1突變體中5個（1，2，3，4和7號）能夠正確表達。通過western blot檢測，其中4個（1，2，4和7號）能夠被細胞內(nèi)的糖基化酶識別，從而被糖基化。非糖基化回復(fù)突變結(jié)果顯示，該4個糖基化位點能夠在細胞中正確被糖基化。同時，ELISA結(jié)果顯示糖基化并不影

4、響受體在細胞膜上的表達。在IP3功能檢測中，只有4號和7號能夠產(chǎn)生預(yù)期結(jié)果，可以阻礙受體的激活。藥學(xué)動力學(xué)和非糖基化突變結(jié)果顯示，這兩個糖基化位點對于阻礙GB1與GB2的相互靠攏是充分有效的，對受體的激活起空間位阻作用。 本課題研究的結(jié)果顯示，VFT區(qū)相互靠攏是GABAB受體激活過程的關(guān)鍵起始步驟，阻礙或減緩VFT區(qū)間的互作都會影響整個受體的激活過程。通過本課題的研究，對于闡明GABAB受體的精細調(diào)控機制將提供一定的理論參考，同