胍丁胺鞘內(nèi)鎮(zhèn)痛的可行性研究.pdf

1、阿片類藥物是臨床最常用、最有效的鎮(zhèn)痛藥物，但在應(yīng)用中可伴隨嚴(yán)重的副作用。椎管內(nèi)給藥具有用量小、不良反應(yīng)發(fā)生率低、鎮(zhèn)痛作用持久的優(yōu)點，卻易引發(fā)阿片耐受。目前，尋找可強(qiáng)化阿片類藥物鎮(zhèn)痛作用，減少其用量及降低不良反應(yīng)的新型輔助藥物已經(jīng)成為研究的熱點。胍丁胺(agmatine，AG)是咪唑啉受體(imidazoline receptor，IR)的內(nèi)源性配體，廣泛存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)，作用于咪唑啉受體和α2腎上腺素受體，并可能在受體后與阿片、NM

2、DA受體間相互作用，被認(rèn)為是一種新的神經(jīng)遞質(zhì)和/或神經(jīng)調(diào)質(zhì)。研究表明胍丁胺可以顯著提高阿片類藥物的鎮(zhèn)痛作用，還能有效地預(yù)防和治療嗎啡的耐受和依賴；還可能通過作用于咪唑啉受體參與某些神經(jīng)遞質(zhì)(如兒茶酚胺)和激素的釋放，產(chǎn)生降低血糖和利尿等多種生物學(xué)效應(yīng)；從而拮抗疼痛所引起的高血壓、高血糖等應(yīng)激反應(yīng)。目前椎管內(nèi)應(yīng)用胍丁胺強(qiáng)化阿片類藥物鎮(zhèn)痛，減輕嗎啡耐受和依賴尚缺乏系統(tǒng)性的研究。因此，本課題擬通過在體和離體兩部分實驗探討胍丁胺作為椎管內(nèi)阿片類

3、藥物輔助藥的可行性：
　　實驗一觀察胍丁胺對原代培養(yǎng)脊髓神經(jīng)元的毒性作用及對谷氨酸(glutamate，Glu)損傷后神經(jīng)元的影響。采用原代細(xì)胞培養(yǎng)法，分離培養(yǎng)胚胎大鼠脊髓神經(jīng)元，3d后加入不同濃度的AG(0.5～80μg/ml)繼續(xù)培養(yǎng)12h、24h和36h，接著采用四甲基氮唑藍(lán)法和中性紅法分別測定胍丁胺對細(xì)胞存活率以及毒性的影響。另外在加入AG的同時給予2mmol/LGlu對細(xì)胞進(jìn)行損傷，建立體外神經(jīng)元損傷模型，然后進(jìn)行細(xì)胞形

4、態(tài)學(xué)觀察、β-tubulinⅢ免疫細(xì)胞化學(xué)染色、四甲基氮唑藍(lán)法測定細(xì)胞存活率、Hoechst33342和PI染色檢測細(xì)胞凋亡和壞死率，同時檢測神經(jīng)元中丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AG濃度低于40μg/ml時對正常培養(yǎng)脊髓神經(jīng)元的存活沒有影響，當(dāng)AG達(dá)到80μg/ml后，神經(jīng)元生長受到一定影響；給予Glu損傷后，神經(jīng)元細(xì)胞生長狀態(tài)較差，出現(xiàn)退化，而且細(xì)胞存活率顯著下降，壞死和凋亡率顯著增高(P＜0

5、.05或0.01)，給予AG干預(yù)(AG-Glu組)細(xì)胞生長顯著優(yōu)于Glu組，且細(xì)胞凋亡和壞死率降低，細(xì)胞存活率增高，MDA含量減少(P＜0.05)。提示AG作為一種新型神經(jīng)遞質(zhì)或調(diào)質(zhì)，在對正常生理情況下神經(jīng)元的生長沒有毒副作用，而在Glu誘導(dǎo)損傷條件下，能抑制Glu誘導(dǎo)的損傷；其發(fā)生機(jī)制可能與AG通過拮抗N-甲基-M-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受體，阻斷或抑制Glu的氧化毒性的級鏈反應(yīng)有關(guān)。
　

6、　實驗二觀察脊髓水平給予胍丁胺對鞘內(nèi)嗎啡鎮(zhèn)痛作用的影響。30只SD大鼠隨機(jī)分為3組，每組10只。C1組：鞘內(nèi)注射生理鹽水10μl；M1組：鞘內(nèi)注射嗎啡(15μg/10μl)；AM1組：鞘內(nèi)同時給予嗎啡15μg+胍丁胺12.5μg/10μl。所有大鼠均于鞘內(nèi)給藥后5min于跖部皮下注射蜜蜂毒50ul(0.2mg)致痛，觀察并紀(jì)錄1h內(nèi)大鼠的自發(fā)縮足反射次數(shù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與C1組比較，M1組(嗎啡組)1h內(nèi)大鼠的自發(fā)縮足反射次數(shù)顯著減少，提示

7、鞘內(nèi)注射嗎啡對蜜蜂毒誘致的自發(fā)痛具有顯著性抑制作用(P＜0.05)；鞘內(nèi)同時給予嗎啡和胍丁胺(AM1組)，大鼠自發(fā)縮足反射次數(shù)進(jìn)一步減少，與M1組比較具有顯著性意義(P＜0.05)，提示鞘內(nèi)胍丁胺和嗎啡聯(lián)合用藥可顯著增強(qiáng)嗎啡對蜜蜂毒誘致自發(fā)痛的抑制作用，具有協(xié)同效應(yīng)。
　　實驗三觀察胍丁胺對鞘內(nèi)嗎啡耐受的翻轉(zhuǎn)效應(yīng)。24只SD大鼠隨機(jī)分為3組，每組8只。C2組：生理鹽水對照組；M2組：嗎啡耐受組，鞘內(nèi)注射15μg嗎啡5μl+0.9％

8、氯化鈉注射液10μl連續(xù)4天；AM2組：嗎啡耐受＋胍丁胺組，鞘內(nèi)注射15μg嗎啡5μl+0.9％氯化鈉注射液10μl每天兩次，連續(xù)3天后，第四天鞘內(nèi)注射15μg嗎啡5μl+12.5μg胍丁胺10μl。所有大鼠均于每次給藥后10min后檢測大鼠熱刺激潛伏期和機(jī)械刺激閾值。另取24只SD大鼠分組和前3天處理同上，在第4天鞘內(nèi)注射藥物5min后，于跖部皮下注射蜜蜂毒50μl(0.2mg)致痛，觀察并紀(jì)錄1h內(nèi)大鼠的自發(fā)縮足反射次數(shù)。結(jié)果：與對

9、照組比較，鞘內(nèi)嗎啡可顯著提高正常大鼠熱刺激潛伏期和機(jī)械刺激閾值(P＜0.05)；連續(xù)注射嗎啡三天后，嗎啡(M2組)提高痛閾的效應(yīng)消失，熱刺激潛伏期和機(jī)械刺激閾值基本正常，與對照組比較無顯著性差異(P﹥0.05)，提示嗎啡耐受形成；第4天胍丁胺和嗎啡聯(lián)合用藥(AM2組)后，嗎啡耐受大鼠已降低的熱和機(jī)械刺激閾值又明顯升高，與嗎啡組(M2)和第3天給藥后比較均有顯著性差異(P＜0.05)；同樣，胍丁胺和嗎啡聯(lián)合用藥組對蜜蜂毒誘致自發(fā)痛的抑制作