蛋白酶激活受體在人單核細胞和T細胞上的表達及功能.pdf

1、凝血酶、胰蛋白酶、類胰蛋白酶和彈性蛋白酶等絲氨酸蛋白酶能調(diào)節(jié)凝血和纖維蛋白溶解平衡、降解神經(jīng)肽以參與神經(jīng)性水種,調(diào)控補體系統(tǒng)從而在炎癥反應時發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。近年的研究顯示,它們還能通過蛋白酶激活受體(proteinase activated receptor, PARs)調(diào)節(jié)細胞的功能而在炎癥和免疫反應中起重要作用。PARs是新的G蛋白偶聯(lián)受體,目前已發(fā)現(xiàn)有四種PARs,分別為PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4,凝血酶可以

2、激活PAR-1、PAR-3和PAR-4,胰蛋白酶可以激活PAR-1、PAR-2和PAR-4,類胰蛋白酶和彈性蛋白酶可以激活 PAR-2。單核細胞和T淋巴細胞是炎征和免疫反應重要的效應細胞,但是 PARs在人外周血單核細胞和T細胞上表達及它們分泌的細胞因子上的影響則知之甚少。
　　采用磁激活的細胞分選法(magnetic activated cell sorting, MACS)純化人外周血單核細胞和T細胞,分別用RT-PCR和流式

3、細胞術檢測外單核細胞和T細胞上的PARs在基因和蛋白質(zhì)水平的表達;用凝血酶、胰蛋白酶、類胰蛋白酶和彈性蛋白酶及 PARs的激動肽分別激發(fā)MACS純化后單核細胞和淋巴細胞16小時后,用ELISA檢測單核細胞培養(yǎng)上清液中的IL-6、IL-1β和IL-12,T細胞培養(yǎng)上清液中的IL-6和IL-13。
　　實驗顯示,人外周血單核細胞表達PAR-1、PAR-3和PAR-4但不表達PAR-2蛋白質(zhì),單核細胞表達PAR-1和PAR-3,但是不表

4、達PAR-2和PAR-4 mRNAs。凝血酶、胰蛋白酶、類胰蛋白酶和彈性蛋白酶呈濃度依賴性地誘導單核細胞產(chǎn)生IL-6,當這些蛋白酶酶活性被它們的抑制劑抑制后,它們誘導單核細胞產(chǎn)生 IL-6的能力被抑制。PAR-1激動肽SFLLR-NH2和PAR-4激動肽 GYPGQV-NH2可濃度依賴性地誘導單核細胞產(chǎn)生 IL-6, PAR-1反激動肽RLLFS-NH2和PAR-4反激動肽VQGPYG-NH2不能誘導單細胞產(chǎn)生IL-6,而PAR-3激動

5、肽TFRGAP-NH2和反激動肽PAGRFT-NH2對于單核細胞產(chǎn)生IL-6無明顯作用。蛋白酶及PAR激動肽在各自工作濃度對于單核細胞產(chǎn)生IL-1β和IL-12無明顯作用。
　　實驗還顯示,人外周血T細胞表達PAR-1、PAR-和PAR-3但不表達PAR-4蛋白質(zhì),與流式細胞結(jié)果一致,T細胞表達PAR-1、PAR-2和PAR-3,但是不表達PAR-4 mRNAs。凝血酶、胰蛋白酶、類胰蛋白酶呈濃度依賴性地誘導T細胞產(chǎn)生IL-6,當

6、這些蛋白酶酶活性被它們的抑制劑抑制后,它們誘導T細胞產(chǎn)生IL-6的能力被抑制。PAR-1拮抗劑,SCH79797,在濃度為1μM時能夠抑制凝血酶和胰蛋白酶誘導的T細胞 IL-6的產(chǎn)生;FSLLRY-NH2是PAR-2拮抗劑,當其在濃度為400μM時幾乎完全抑制胰蛋白酶和類胰蛋白酶引起的T細胞IL-6的產(chǎn)生。PAR-1相對特異的激動肽SFLLR-NH2在濃度為100?M時誘導的T細胞IL-6釋放量較基礎釋放量增加3.6倍,PAR-1反激動

7、肽RLLFS-NH2對于T細胞產(chǎn)生IL-6無明顯作用;與此相似,PAR-1特異的激動肽TFLLRN-NH2在50?M濃度時明顯地誘導的T細胞產(chǎn)生IL-6,而反激動肽NRLLFT-NH2對于T細胞產(chǎn)生IL-6無明顯作用。PAR-2特異的激動肽SLIGKV-NH2在濃度為10和100?M時能夠呈濃度依賴性地促進T細胞產(chǎn)生IL-6,SLIGKV-NH2在濃度為100?M時誘導的T細胞IL-6釋放量較基礎釋放量增加3.5倍,而反激動肽VKGIL

8、S-NH2對于T細胞產(chǎn)生IL-6無明顯作用。PAR-3激動肽 TFRGAP-NH2和反激動肽 PAGRFT-NH2、PAR-4兩個激動肽 GYPGQV-NH2和AYPGKF-NH2及它們的反激動肽 VQGPYG-NH2和FKGPYA-NH2不能誘導 T細胞產(chǎn)生IL-6。PARs的各種激動肽和反激動肽在工作濃度均不能誘導T細胞產(chǎn)生IL-13。
　　總之,凝血酶、胰蛋白酶、類胰蛋白酶和彈性蛋白酶等絲氨酸蛋白酶可以誘導高度純化的成人外周