大鼠急性腦出血條件下的血液流變學改變及粘附分子的表達.pdf

1、目的： 腦出血后血腫周圍組織存在微循環(huán)障礙，最終導致繼發(fā)性腦損傷。血液流變學異常作為機體重要的調(diào)節(jié)途徑，可能在此過程中起到積極的促進作用。本研究制作大鼠內(nèi)囊出血模型，從血液流變學角度出發(fā)，觀察其在腦出血后的經(jīng)時變化，總結內(nèi)在規(guī)律，以探討腦微循環(huán)障礙的機制，同時擬從粘附分子——ICAM-1、VCAM-1水平闡述繼發(fā)性腦損傷的病理過程及其對血液流變學的影響。這不僅讓我們對腦出血后繼發(fā)性損傷有嶄新的認識，而且對于采取積極有效的干預措施

2、，改善腦出血患者的預后有非常重要的指導意義。 方法： 1 實驗動物及分組：Wistar大鼠70只，隨機分為生理鹽水對照組和腦出血組，根據(jù)術后觀察時間每組又分為3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、7 d七個亞組；上述每個時限點，生理鹽水對照組每組4只，腦出血組每組6只。 2 自體血注入法建立大鼠內(nèi)囊出血模型：大鼠麻醉后，固定于鼠腦立體定位儀上。根據(jù)大鼠腦立體定位圖譜，利用立體定位儀準確定位內(nèi)囊后

3、肢，于定位點利用牙科鉆施行顱骨打孔術，斷尾取血100μl，用微量注射器于內(nèi)囊位置注入，建立內(nèi)囊出血的大鼠模型。對照組注入等量生理鹽水。 3 大鼠造模后行為學評價：采用Bederson評分方法和觸須誘發(fā)前肢放置檢測法對大鼠進行造模后行為學評價。 4 大鼠腦組織病理標本制備及病理形態(tài)學觀察：各組大鼠造模成功后在不同時限點迅速取腦，固定于10％甲醛溶液中，石蠟包埋，于內(nèi)囊出血區(qū)冠狀面做腦組織切片，HE染色，光鏡下觀察其病理學的

4、改變。 5 大鼠血腫周圍腦組織ICAM-1、VCAM-1的表達：采用ICAM-1、VCAM-1試劑盒對腦切片進行免疫組化染色，觀察陽性細胞及血管表達情況并計數(shù)。 6 血液流變學檢測：達到觀察時限點后，麻醉大鼠，無菌操作下開胸，暴露心臟，無菌注射器自左心室采血4．5 ml，置于用肝素抗凝管中送生化室。全自動血流變儀檢測全血高切粘度（150s-1）、全血低切粘度（10s-1）、血漿粘度和紅細胞聚集指數(shù)，自動生化分析儀采用比濁

5、法測纖維蛋白原含量，離心沉淀法測紅細胞壓積。 7 統(tǒng)計學方法：應用SPSS11．5軟件，數(shù)據(jù)結果均用x±s表示，組內(nèi)比較及組間比較均采用方差分析中的SNK法，α=0．05。 結果： 1 大鼠自體血腦內(nèi)注入法復制大鼠內(nèi)囊出血模型的行為學測試：Bederson評分：可見出血組大鼠均不同程度的出現(xiàn)了軀體功能障礙的表現(xiàn)，均發(fā)生了2分以上的偏癱。觸須誘發(fā)前肢放置檢測法：腦出血組，出血對側(cè)前肢放置正確率為23％，出血同側(cè)放置

6、正確率為89％，提示內(nèi)囊出血模型建立后，動物出現(xiàn)明顯的對側(cè)運動功能障礙。 2 通過大體標本及病理切片確定出血部位正位于內(nèi)囊后肢，光鏡可見血腫區(qū)域及周邊部染色較淺，血腫部位腦組織充滿紅細胞，血腫周圍有炎癥細胞浸潤；并可見周圍腦組織細胞間隙變大，細胞腫脹，提示有腦水腫發(fā)生。 3 ICAM-1、VCAM-1免疫組化染色，對照組僅見少量陽性血管，各時限點表達水平相同。出血組各時限點出現(xiàn)不同程度的陽性反應血管和細胞。出血后3 h即

7、有表達增強，24 h表達明顯，72 h達高峰，此時陽性細胞和血管數(shù)量最多，而且染色均很強，持續(xù)至7 d仍有表達。 4 血液流變學檢測顯示出血后各參數(shù)都發(fā)生了異常改變，與對照組比較，全血粘度和血漿粘度均增高。全血高切粘度隨時間推移逐漸增高，在24 h達高峰，至7 d水平下降但仍高于對照組。全血低切粘度在48 h達高峰，7 d時接近對照組水平。血漿粘度和紅細胞壓積在出血后3 h即升高，24 h達高峰，隨后呈下降趨勢。紅細胞聚集指數(shù)增

8、強出現(xiàn)在6 h，高峰時間從12 h持續(xù)到48h，7 d時降低但仍高于對照組。纖維蛋白原含量在6 h升高，48 h升高最顯著，并持續(xù)至72 h，7 d時有所降低。 結論： 1 利用腦立體定位技術及自體血腦內(nèi)注入法可成功制作大鼠內(nèi)囊出血模型。 2 腦出血后血液流變學發(fā)生異常改變，血液粘度升高、紅細胞壓積增加、紅細胞聚集指數(shù)增強和纖維蛋白原含量增加共同作用，導致紅細胞聚集，變形能力降低，血液淤滯，腦血流量降低，微循環(huán)功