超臨界CO-,2-技術(shù)對(duì)三種酶構(gòu)象影響及對(duì)哈密瓜汁中酶活性鈍化效果研究.pdf

1、超臨界二氧化碳技術(shù)（SCCO2）作為一種新型的非熱殺菌技術(shù)引起了國(guó)內(nèi)外廣泛關(guān)注，本文研究了超臨界二氧化碳技術(shù)對(duì)過(guò)氧化物酶（POD）、多酚氧化酶（PPO）和脂肪氧化酶（LOX）三種酶活性鈍化效果及構(gòu)象影響，采用電泳方法、圓二色光譜法及熒光光譜法檢測(cè)了處理后的POD、PPO和LOX的一級(jí)、二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)的變化，并用TEM對(duì)處理后的POD、PPO和LOX蛋白分子進(jìn)行了形態(tài)觀察；同時(shí)研究了SCCO2對(duì)哈密瓜汁中酶在處理后和貯藏期內(nèi)活性的變化以及

2、SCCO2對(duì)哈密瓜汁色澤與褐變度影響。主要結(jié)果和結(jié)論如下： （1）SCCO2處理對(duì)POD、PPO、LOX這三種酶的鈍化效果顯著高于熱處理，溫度為65℃條件下，POD熱處理60min酶活為44.62％，而在超臨界處理?xiàng)l件（35MPa，65℃）下處理60min，殘存酶活降低至1.96％；溫度為65℃條件下，PPO熱處理60min酶活為18.09％，而在超臨界處理?xiàng)l件（15MPa，55℃）下處理30min，殘存酶活為0.09％，45m

3、in時(shí)其酶活為0；溫度為65℃條件下，LOX熱處理60min酶活為26.78％，而在超臨界處理?xiàng)l件（15MPa，55℃）下處理5min，殘存酶活降低至0.22％，15min時(shí)LOX完全失活。 （2）SDS-PAGE電泳技術(shù)表明經(jīng)過(guò)超臨界二氧化碳處理后，POD、PPO和LOX的肽鏈沒(méi)有發(fā)生斷裂，酶蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu)沒(méi)有發(fā)生變化，說(shuō)明超臨界二氧化碳處理不會(huì)破壞酶蛋白中氨基酸的排列順序。透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)酶蛋白直徑變大，推測(cè)是酶蛋白分子發(fā)生

4、了聚合反應(yīng)。 （3）SCCO2處理后，POD、PPO和LOX的CD光譜和熒光光譜圖均發(fā)生變化。隨著處理壓力的增加，α-螺旋相對(duì)含量逐漸降低，隨著處理壓力的增大熒光強(qiáng)度增加，處理后三種酶的三級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，處理壓力越大，構(gòu)象變化越大。 （4）SCCO2處理對(duì)哈密瓜汁中POD、PPO和LOX酶有較好的鈍化作用，一級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)能較好的分析鈍化反應(yīng)，隨著壓力和溫度的升高，D值下降，k值上升。較高的壓力和溫度能達(dá)到較好的鈍化效果。

5、在4℃貯藏期內(nèi)超臨界二氧化碳處理后哈密瓜汁中三種酶活性有不同程度的恢復(fù)，而且這種恢復(fù)的程度與處理?xiàng)l件如壓力的強(qiáng)度有關(guān)，較高的壓力和較長(zhǎng)處理時(shí)間的處理樣品在貯藏期活性恢復(fù)程度比較小。 （5）SCCO2處理后哈密瓜汁L值下降，在35MPa條件下，下降幅度最小?！鱁值在35MPa條件下增長(zhǎng)幅度為1.15，增幅最小，顏色變化最不明顯。隨著壓力的增大，處理時(shí)間延長(zhǎng)能有效抑制哈密瓜汁的褐變。在4℃貯藏期間褐變度A顯著小于未處理樣品。SCCO