中草藥對(duì)犬生殖系統(tǒng)影響及促進(jìn)犬發(fā)情機(jī)理研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)綜合醫(yī)學(xué)治療婦女不孕癥的經(jīng)驗(yàn)和獸醫(yī)臨床上誘導(dǎo)豬、牛、羊等發(fā)情的實(shí)驗(yàn)報(bào)道，篩選出12種中草藥。按照祖國(guó)醫(yī)藥學(xué)傳統(tǒng)理論，考查藥物間的合理配伍及藥物與動(dòng)物生殖內(nèi)分泌之間的關(guān)系，用現(xiàn)代科學(xué)手段考查中草藥各成分在處方中的作用，合理組方，使藥物間產(chǎn)生協(xié)同作用。組成八個(gè)方劑應(yīng)用于小白鼠，觀測(cè)了小白鼠子宮和卵巢總重量、子宮角中段外徑厚度、子宮角長(zhǎng)度及卵巢、子宮的組織學(xué)變化，根據(jù)不同方劑對(duì)小白鼠上述檢測(cè)指標(biāo)的影響，篩選出對(duì)小白鼠生殖系統(tǒng)有較大促進(jìn)作

2、用的中草藥組方。將中藥組方應(yīng)用于處于間情期的健康京巴母犬。每只母犬每天經(jīng)口灌服復(fù)方中草藥煎劑4ml，連用20d。每天觀察試驗(yàn)犬的行為變化、外觀變化、陰道黏液變化。用藥期間定期靜脈采血，分離血清，測(cè)定雌二醇、孕酮和白細(xì)胞介素-1、白細(xì)胞介素-6的變化，在用藥后的第14d、16d、18d、20d、25d剖殺試驗(yàn)犬，取出其卵巢、子宮和陰道，制成切片，于光學(xué)顯微鏡下觀察卵巢、子宮內(nèi)膜和陰道等的組織學(xué)變化規(guī)律。將中藥組方制成注射液，用于子宮灌注。

3、同時(shí)對(duì)注射液進(jìn)行了穩(wěn)定性、安全性、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)，最后進(jìn)行了藥物誘導(dǎo)犬發(fā)情效果的試驗(yàn)研究。試驗(yàn)結(jié)果如下：　　1.不同中藥處理后小白鼠的子宮和卵巢總重量、子宮角中段外徑厚度及大、中型卵泡比例和最大卵泡直徑較對(duì)照組均發(fā)生了顯著變化，其中，中藥組方Ⅱ、中藥組方Ⅳ和中藥組方Ⅴ的子宮卵巢重與體重的比值、子宮角中段外徑厚度較對(duì)照組顯著增大(P＜0.01)，說(shuō)明中藥組方Ⅱ、中藥組方Ⅳ、特別是中藥組方Ⅴ對(duì)小白鼠的生殖系統(tǒng)發(fā)育有顯著的促進(jìn)作用

4、?！　?.根據(jù)篩選結(jié)果，確定中藥組方Ⅴ為最佳組方。并用其誘導(dǎo)母犬發(fā)情。應(yīng)用該組方誘導(dǎo)母犬發(fā)情開(kāi)始時(shí)，受試犬血漿中E2的平均含量為10pg/ml左右，用藥5d后開(kāi)始增加，第9d時(shí)迅速增加，至第15d(即發(fā)情前期結(jié)束前1～2d)時(shí)達(dá)到峰值58.33pg/ml，隨后，E2濃度迅速下降。于25d降到18.17pg/ml。P4濃度在用藥時(shí)及整個(gè)發(fā)情前期均很低，用藥5d時(shí)濃度為0.12ng/ml，到17d濃度達(dá)到0.32ng/ml并持續(xù)升高，到2

5、1d(排卵前后)時(shí)其濃度可升高到2.21ng/ml左右，以后逐漸升高，到25d達(dá)到6.42ng/ml?！　?.應(yīng)用中藥組方Ⅴ藥物5d后，犬血漿中IL-1β濃度達(dá)到0.578ng/ml，并持續(xù)升高，在17d達(dá)到峰值0.830ng/ml，到21d排卵前后降到0.703ng/ml，25d降到0.608ng/ml。而IL-6濃度在第5d為0.163ng/ml，以后持續(xù)升高，到17d達(dá)到0.312ng/ml，到21d排卵前后達(dá)到峰值0.348n

6、g/ml，以后開(kāi)始下降，到25d降為0.285ng/ml?！　?.應(yīng)用中藥組方Ⅴ藥物7d后，50％試驗(yàn)犬從陰道排出暗紅色血樣分泌物，陰道涂片中出現(xiàn)紅細(xì)胞；用藥后14d時(shí)，陰道涂片中出現(xiàn)角化細(xì)胞。中藥應(yīng)用后犬的陰道壁厚度，卵巢重量都較對(duì)照組有極顯著(P＜0.01)的變化；子宮角圓周長(zhǎng)，子宮體圓周長(zhǎng)變化顯著(P＜0.05)；子宮切片顯示，子宮內(nèi)膜水腫，表層的子宮腺體大小不等，形狀不規(guī)則，有的腺體內(nèi)有紅細(xì)胞。卵巢切片中可見(jiàn)卵泡開(kāi)始發(fā)育，出現(xiàn)

7、卵泡腔。用藥后17d，陰道涂片中角化細(xì)胞數(shù)量增多，細(xì)胞核模糊不清；子宮切片顯示，子宮內(nèi)膜進(jìn)一步增厚，腺體增生；卵巢切片中出現(xiàn)有腔卵泡，卵泡數(shù)量增多，形成顆粒層和卵丘。用藥后20d時(shí)，陰道涂片中細(xì)胞完全角化，細(xì)胞核不明顯；子宮切片顯示，子宮內(nèi)膜有明顯凹凸，內(nèi)膜厚度增加，表層腺體的切面小呈環(huán)狀，深部腺體稍大，排列緊密，表明腺體細(xì)胞處在機(jī)能活躍狀態(tài)；卵巢切片中可見(jiàn)即將成熟排卵的卵泡，卵巢體積急劇增大，卵泡腔增大，直徑可達(dá)3～4mm，卵泡腔內(nèi)充

8、滿卵泡液，卵細(xì)胞與卵丘分離，顆粒層變薄，卵泡膜清楚可見(jiàn)。卵泡已經(jīng)移行到卵巢表面，即將排卵。　　5.中藥組方Ⅴ注射液對(duì)光和熱穩(wěn)定，對(duì)豚鼠皮膚無(wú)過(guò)敏反應(yīng)，對(duì)家兔眼具有溫和的刺激作用，急性毒性試驗(yàn)中口服安全可靠，腹腔注射測(cè)得LD50=1920.84+133.66mg/kg，最大耐受量110倍?！　?.中藥組方Ⅴ注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)根據(jù)三種不同展開(kāi)劑所得的三種層析譜的結(jié)果分析，注射液中含有菟絲子、紅花、益母草、淫羊藿、女貞子、香附等成分。三種

9、層析譜可作為該注射液的層析檢識(shí)。從紫外吸收曲線來(lái)看，該注射液在波長(zhǎng)245～260nm處有一個(gè)黃酮類化合物形成的吸收峰，在波長(zhǎng)265～280nm處有一個(gè)生物堿類化合物形成的吸收峰，此波長(zhǎng)吸收度曲線也是該注射液的特征性吸收曲線。　　7.中藥組方Ⅴ的藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，中藥組方Ⅴ的ka值為3.6769/h或2.6809/h，Tp值為1.1732h或1.239h，Cmax值為3324.277μg/ml或254.277μg/ml，kel為0