梅花鹿粘膜病病毒的分離鑒定.pdf

1、該研究用吉林省某鹿場母鹿流產胎兒的肝臟病料,經MDBK細胞適應培養(yǎng),獲得一株病毒(命名為MDVCC-deer6).該分離毒能在MDBK細胞上形成有規(guī)律的病變,其病變形態(tài)與病變時間同標準株牛病毒性腹瀉-粘膜病病毒一致.電鏡負染觀察,病毒粒子呈典型粘膜病病毒形態(tài).血凝試驗表明,該病毒對雞、兔、豬和綿羊的紅細胞均無血凝性;毒力測定,該病毒的TCID50為10-5.5.理化學研究表明,該病毒對氯仿、乙醚敏感;胰酶試驗中,經37℃,1小時處理的病

2、毒,仍然能夠在MDBK細胞上生長,但毒力下降3.2個滴度.耐酸性試驗中,病毒在pH3.0經37℃作用1小時,毒力下降4.4個滴度;耐堿性試驗中,病毒在pH9.0經37℃作用1小時,毒力下降0.4個滴度.耐熱性試驗中,該病毒在恒定溫度50℃,設定不同時間,從30分鐘到7 0分鐘,毒力均有不同程度下降.其中,5 0℃作用30分鐘,病毒平均下降0.6個滴度;50℃,70分鐘,病毒平均下降3.7個滴度;恒定溫度56℃,設定不同時間,從30分鐘到

3、70分鐘,毒力也均有不同程度下降.其中,56℃作用30分鐘,病毒平均下降2個滴度;56℃,70分鐘,病毒完全滅活.中和試驗表明,粘膜病病毒特異陽性血清能完全中和該分離毒.綜上實驗結果,可初步確定該分離毒屬于粘膜病病毒.分子生物學鑒定方面,選用MDV標準株的高度保守的P125區(qū)序列設計引物.合成該引物,選擇梅花鹿母鹿的流產胎兒肝組織原代病料和該分離毒的各代細胞培養(yǎng)物,均成功地擴增出了約400bp目的片段,與國際標準毒株一致,而未接毒MDB