28338.高等培菌白蟻高效利用木質(zhì)纖維素的機理研究

1、安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文高等培菌白蟻高效利用木質(zhì)纖維素的機理研究姓名：龍雁華申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：樊美珍黃勇平20090601安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要密螺旋體屬(Treponema)分別是它們相應(yīng)的優(yōu)勢群體；而浮霉菌門(Planctomycetes)、放線菌門(Actinobacteria)、TM7門、脫鐵桿菌門(Deferribacteres)、綠菌f1(Chlorobi)及TG1門的豐度則較低。而菌圃細(xì)菌

2、文庫分析表明，菌圃上細(xì)菌菌群的多樣性明顯低于腸道菌群，但厚壁菌門、變形菌門及擬桿菌門仍為主要組成。在成功分離得到菌圃上的共生真菌Termitomycessp菌株后，對其展開了一系列基礎(chǔ)研究。得到以下結(jié)論：①生長于菌圃上的野生菌大部分情況下成小白球狀，經(jīng)顯微鏡觀察可見由無數(shù)產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)和長橢圓形分生孢子構(gòu)成，并判斷分生孢子是由龐大的球狀胞原生質(zhì)體濃縮而分隔開形成的；②純化菌株的ITS區(qū)序列(GenBANK號：FJ769410)與野生菌株的IT

3、S區(qū)序列(GenBANK號FJ769409)基本一致，表明兩者為同一菌株，同時在分類地位上都與TermitomycesspGroup8(AB073529)較近，但由于缺乏野外形成的子實體形狀等分類信息，只能將該菌株鑒定為Termitomycessp；③菌圃及白蟻腸道真菌多樣性的分析表明，在野外良好的共生狀態(tài)下，菌圃上只生長一種Termitomyces屬真菌，未見其他真菌生存，且白蟻腸道真菌與其為同一種，表明該共生真菌為白蟻食物組成的一部

4、分?？紤]到在共生狀態(tài)下，共生真菌極可能在木質(zhì)纖維素降解過程中發(fā)揮著重要作用，本研究首次利用直接在野外菌圃上采集的野生菌為材料，通過SMARTTMcDNA文庫構(gòu)建試劑盒構(gòu)建了一個全長cDNA文庫。所構(gòu)建的文庫經(jīng)檢測，文庫滴度為7x106Pfu／m，庫容量為35106Pfu，文庫重組率達(dá)97％，平均插入片段長度約為133Kb，文庫質(zhì)量合格。在此基礎(chǔ)上，建立了引物PCR篩選目的基因的技術(shù)平臺，經(jīng)過兩輪PCR篩選成功獲得一個含木聚糖酶基因的陽性

5、克隆，記為XylC5。該目的基因序列在3’端存在明顯的polyA結(jié)構(gòu)，可編碼226個氨基酸，預(yù)測分子量大小約為24KDa，在43位氨基酸至223位氨基酸處為GHFIl的功能域，并且129氨基酸和220氨基酸兩個位點為活性位點，均為谷氨酸，NCBI比對后多數(shù)與曲霉屬Aspergillus真菌木聚糖酶基因的序列一致性在58％60％，可判定這是首個來自Termitomyces屬真菌的木聚糖酶基因。最后，構(gòu)建了一個pET22bx重組質(zhì)粒、轉(zhuǎn)化感