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1、河北大學(xué)碩士學(xué)位論文枯草芽孢桿菌BS26菌株的發(fā)酵及纖溶酶的分離純化姓名:牛術(shù)敏申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師:朱寶成20080601AbstractAbstractThrombosisintimidatesmankind’Slifeandhealthseriously;themorbidityofithasincreasedFibrinolytictherapyisavailableCurrentfibrinolytice
2、nzymesavailableforclinicalusearemostlyplasminogenactivatorsDespitetheirwidespreaduse,alltheseagentshaveundesiredsideeffectsandareveryexpensiveThereforethesearchesfornewfibrinolyticenzymesfromvarioussourcesarebeingcontinu
3、edThedissertationfocusedonoptimizationofliquidfermentationconditionofBacillusBS26forfibrinolyticenzymeproduction,partialcharacteristicsandpurificationofthefibrinolyticenzymeTheBacillusBS26wasidentifiedasBacillussubtilisb
4、ymorphological,physiologicalandbiochemicalcharacteristicsand16SrDNAanalysisFirstlyaccordingtosinglefactorexperiment,studiesonthefermentationconditionoffibrinolyticenzymeproductionshowedthatitsoptimumcarbonsourceisdextrin
5、,nitrogensourceisyeastextractpowderandmineralsaltsareCaCl2andMgS04。7H20Accordingtoorthogonalexperiment,theoptimalfermentationmediumproportionsweredextrin3%,yeastextractpowderl%,CaCl2O02%,MgS04。7H20007%Theoptimumshakingfl
6、askfermentationconditionwereinitialpH70andtheinoculumvolume6%,mediavolume70/250(mL/mL),fermentationtemperature37。C,rotatespeed180r/min,fermentationtime60hUndertheseconditions,thestrain’Sfibrinolyticenzymeactivitywas59303
7、U/mL,whichWas45foldsoftheoriginalfermentationmediumandconditionsTheproteinswereextractedbyammoniumsulphateprecipitationfromthefermentedbrothofBacillussubtilisBS26Assaysforproteinsfibrinolyticactivityweredoneonfibrinplate
8、ThefibrinolyticenzymeWasstableblow50“CandpH50110,theoptimalreactiontemperatureandpHvaluewere42。CandpH90respectivelyThefibrinolyticactivityWasenhancedbytheadditionofCa2andMgions,butcompletelyinhibitedbyCu2andfullyinhibite
9、dby10mmoVLPMSFlmg/mLCHOMand10mg/mLSBTI,whichindicatedthattheenzymebelongstoserineproteasegroupOnplasminogen—freefibrinplatesandplasminogenfibrinplates,thefibrinolyticactivityhadnoobviousdifference,indicatingthattheenzyme
10、isafibrinolyticenzymewhichdegradesfibrindirectlybutnotaplasminogenactivatorwhichdegradesfibrinbyactivatingplasminogenAfibrinolyticenzymewaspurifiedfromthefermentedbrothofstrainBS一26byammoniumsulphatefractionalprecipitati
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