水稻草狀矮化病毒對褐飛虱翅型分化的影響.pdf

1、水稻草狀矮化病毒（Rice grassy stunt virus, RGSV），是纖細(xì)病毒屬的成員之一，可以引起水稻草狀矮化?。≧ice grassy stunt disease），簡稱水稻草矮病，是熱帶和亞熱帶地區(qū)水稻上的重要病害之一，嚴(yán)重時甚至可造成水稻的絕產(chǎn)。該病毒由昆蟲介體褐飛虱（Nilaparvata lugens）以持久、增殖性方式傳播。褐飛虱是一種遷飛性害蟲，成蟲具有明顯的翅二型現(xiàn)象。有研究表明，病毒的侵染會對褐飛虱的翅型

2、分化產(chǎn)生影響。本課題通過生物學(xué)統(tǒng)計實驗、熒光定量 PCR實驗、酵母雙雜交實驗、亞細(xì)胞共定位實驗和原核表達(dá)實驗對該問題進(jìn)行了研究，研究結(jié)果如下：
　　1、生物學(xué)統(tǒng)計實驗的結(jié)果表明，褐飛虱攜帶RGSV種群和無毒種群成蟲的翅型分化存在顯著差異，其中無毒蟲的短翅型比例為23.17±0.56％，長翅型比例為60.43±0.22％。而飼過毒的褐飛虱短翅型的比例為36.26±0.42％，長翅型比例為52.32±1.16％。
　　2、通過實

3、時熒光定量 qRT-PCR實驗對褐飛虱翅型分化相關(guān)基因 flightin、Tnc、Titin、LN-a2在褐飛虱體內(nèi)的表達(dá)量進(jìn)行了測定，結(jié)果表明，RGSV侵染后，各基因均表現(xiàn)為下調(diào)。
　　3、成功的構(gòu)建了酵母表達(dá)載體pGADT7-flightin。通過酵母雙雜交實驗得出褐飛虱flightin蛋白能夠與RGSV的P1，P3，P5蛋白產(chǎn)生互作。
　　4、成功構(gòu)建了瞬時表達(dá)載體pEarly gate101-flightin和pEa

4、rly gate102-flightin。通過亞細(xì)胞共定位實驗進(jìn)一步驗證了flightin與RGSV的P1，P3，P5蛋白之間的互作。
　　5、成功構(gòu)建了原核表達(dá)載體pDEST17-flightin，制備了褐飛虱flightin基因的多克隆抗體，Western blot實驗的檢測結(jié)果表明，所制備的抗血清能夠特異性地檢測褐飛虱體內(nèi)的flightin蛋白，間接ELISA檢測結(jié)果表明所制備的抗體效價為1:6400。
　　綜上所述，