貴州省天麻主產區(qū)蜜環(huán)菌多樣性研究及優(yōu)良菌株篩選.pdf

1、蜜環(huán)菌系傘菌目、膨瑚菌科、蜜環(huán)菌屬的兼性寄生性真菌，廣泛分布于世界各地。它是一類具有重要經濟價值的高等真菌，不僅具有清目、利肺、益腸胃、抗痙攣、鎮(zhèn)靜、擴張血管、降血壓等藥理作用，且子實體、菌絲、菌索都可以入藥。此外，名貴中藥豬苓和天麻必須依靠蜜環(huán)菌提供營養(yǎng)才能生長繁殖。
　　目前全球通過互交不育性實驗鑒定的蜜環(huán)菌生物種多達40種，國內鑒定約15種，主要分布在東北、華中、西南地區(qū)。貴州蜜環(huán)菌生物種鑒定與分布調查尚處于起步階段，天麻種

2、植采用蜜環(huán)菌主要從陜西漢中、中國科學院引進，貴州本土蜜環(huán)菌資源基本未開發(fā)。本試驗從貴州天麻主產區(qū)德江等地采集分離蜜環(huán)菌，結合菌絲、菌索形態(tài)與Tef1-a等分子標記研究其地理分布特征、形態(tài)多樣性、物種多樣性與遺傳多樣性，同時篩選促進天麻生長的貴州本土優(yōu)良蜜環(huán)菌。為推動蜜環(huán)菌形態(tài)與遺傳多樣性研究，開發(fā)貴州蜜環(huán)菌資源及探索適合天麻生長的貴州本地蜜環(huán)菌提供理論基礎與幫助。試驗結果如下:
　?、倜郗h(huán)菌菌索的有效分離培養(yǎng)基為蛋白胨2 g，硫酸

3、鎂0.5g，葡萄糖20 g，瓊脂7 g，磷酸二氫鉀0.46 g，磷酸氫二鉀1 g，青霉素10萬單位，慶大霉素20萬單位，水1000 mL，pH自然。其中抗生素是在培養(yǎng)基滅菌后(121℃、30 min)冷卻至40-50℃時加入。75％酒精中浸泡消毒時，幼嫩菌索1 min、老化菌索約2 min為佳。
　?、谫F州天麻主產區(qū)的蜜環(huán)菌在PDA培養(yǎng)基上形態(tài)多樣，依據形態(tài)特征和生長勢大致可劃分為9個形態(tài)群。同時shannon多樣性指數表明貴州天

4、麻主產區(qū)的蜜環(huán)菌形態(tài)多樣、菌群分布均勻，其中形態(tài)群Ⅵ占絕對優(yōu)勢，其次是形態(tài)群Ⅷ。
　　③生物種分子鑒定時，貴州天麻主產區(qū)的蜜環(huán)菌基本為Armillaria gallica、Armillaria mellea、Armillaria cepistipes，其中Armillaria gallica居多，且多分布在海拔1500m左右的地區(qū)。蜜環(huán)菌在rDNA-ITS、rDNA-IGS、Tef1-a序列上的多樣性依次遞增，不論是序列間的兩兩比

5、較還是系統發(fā)育分析，rDNA-ITS都不能很好地區(qū)分開Armillaria gallica和Armillaria cepistipes，但能將它們與Armillaria mellea明顯分開。rDNA-IGS的情況與rDNA-ITS類似，但rDNA-IGS在Armillaria gallica、Armillaria cepistipes菌株間的差異性要略大于rDNA-ITS。Tef1-a在蜜環(huán)菌中差異顯著，遺傳多樣性極豐富。它不僅能區(qū)分

6、Armillariamellea、Armillaria gallica、Armillaria cepistipes，甚至能區(qū)分同種屬的菌株。
　?、芎Y選促進天麻生長的優(yōu)良蜜環(huán)菌時，屬于Armillaria gallica的菌株DJ1對三種天麻都有很好的促進作用，而與Armillaria mellea關系較近的菌株基本不能促進天麻生長。菌株DJ與三種天麻有性栽培半年后，紅天麻產量為1473.3g/m2、烏麻產量為484.7g/m2、

7、綠天麻產量為1706.7g/m2，均顯著性地大于對照和其它菌株。
　　⑤液體發(fā)酵時，各菌株胞外酶活性變化趨勢均是先升后降;各酶在不同菌株間達到最大酶活的時間、最大酶活持續(xù)時間、最大酶活性值存在明顯差異;優(yōu)良菌株DJ1生長最快，4天就能結束發(fā)酵，達到最大酶活時間最短、持續(xù)時間也長。
　?、迌?yōu)良蜜環(huán)菌DJ1在栽培種培養(yǎng)基一上生長速度最快為0.42 cm/d，顯著性地大于其它培養(yǎng)基中的生長速度。此外，栽培種培養(yǎng)基含木屑越多，菌株D