檢測(cè)飼料中主要麥角堿的ELISA試劑盒的制備與評(píng)價(jià).pdf

1、麥角堿(ergot alkaloids，EA)是由麥角菌屬真菌侵害禾本科植物而產(chǎn)生的一大類神經(jīng)性生物堿毒素，可引起作物減產(chǎn)、人畜中毒，研究檢測(cè)飼料中的麥角堿，可以有效評(píng)價(jià)飼料的污染程度，具有深遠(yuǎn)意義。本文主要利用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)和液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS/MS)檢測(cè)青貯飼料中的麥角堿，制備ELISA試劑盒，旨在為進(jìn)一步研究提供技術(shù)支撐主要內(nèi)容如下：
　　 ⑴利用標(biāo)準(zhǔn)品與酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗體和一步法（抗體和酶標(biāo)二

2、抗已首先免疫結(jié)合）制備了檢測(cè)雙氫麥角汀的酶聯(lián)免疫(ELISA)試劑盒，并進(jìn)行了性能評(píng)價(jià)。ELISA方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程是y=-48.652x+940.107，R2=0.9721。在0.1-8.1μg/L范圍內(nèi)線性良好，最佳線性范圍為0.3-2.7μg/L，檢出限是0.1-0.3μg/L，回收率在81.3-106.2％之間，變異系數(shù)為1.7-4.9％。試劑盒的抗體與麥角柯寧堿等其它7種麥角堿沒(méi)有交叉反應(yīng)性，IC50值在0.1-0.9μg/L

3、之間，至少可以保存一年。試劑盒可用于雙氫麥角汀的篩選檢測(cè)，但是其相關(guān)參數(shù)還有待于進(jìn)一步優(yōu)化。
　　 ⑵采用改進(jìn)的QuEChERS方法，利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)進(jìn)一步建立了檢測(cè)青貯飼料中雙氫麥角汀的分析方法，以檢驗(yàn)制備的試劑盒的有效性。為充分利用儀器資源，擴(kuò)大LC-MS/MS方法的檢測(cè)范圍，同時(shí)開(kāi)發(fā)了檢測(cè)麥角柯寧堿、麥角異柯寧堿、麥角克堿、麥角異克堿、麥角隱亭堿、麥角異卡里堿、麥角辛堿7種麥角堿的同步分析方法。本

4、方法采用乙腈和0.1％甲酸-乙酸銨水溶液作為流動(dòng)相，優(yōu)化了液相色譜和質(zhì)譜的條件。8種麥角堿的溶劑和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程的相關(guān)系數(shù)分別是0.9969-1.0000和0.9979-0.9987，儀器檢出限0.1-1μg/L，方法檢出限1-2μg/kg，方法定量限2-5μg/kg，平均添加回收率66.84-103.66％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差5.07-14.44％，滿足國(guó)內(nèi)外分析方法的要求。ELSIA方法和LC-MS/MS方法的比對(duì)試驗(yàn)表明，ELIS