山東省濰坊地區(qū)鴨源H9N2亞型AIV的分離鑒定及HA基因序列分析.pdf

1、禽流感是由A型流感病毒引起的禽類傳染病，臨床表現(xiàn)為呼吸道感染，產(chǎn)蛋量下降，頭頸水腫和腹瀉。H9亞型禽流感為低致病力禽流感，能引起少量死亡或不死亡，表現(xiàn)為生長障礙和產(chǎn)蛋量下降。H9亞型禽流感病毒(AIV)在包括我國在內(nèi)的東南亞及世界許多國家分布廣泛，中國大陸1994年首次公開報道從雞群中分離到H9亞型AIV，隨后便在一些地區(qū)形成小規(guī)模的流行，未波及全國。但1998年春夏開始的H9亞型禽流感在短短的幾個月時間內(nèi)就形成波及20多個省區(qū)的全國范

2、圍大流行，給我國的養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。1998年以來我國發(fā)生的H9亞型AI傳播效率高、速度快和范圍廣，1999年又從人類病毒中分離出H9亞型AIV，對于它存在的潛在危害已經(jīng)越來越多的受到關(guān)注。
　　 本試驗(yàn)從山東省濰坊地區(qū)發(fā)生疑似禽流感的病死鴨臟器中分離出4株H9亞型禽流感病毒，并對其進(jìn)行了生物學(xué)特性研究和HA基因的序列分析。旨在了解分離的4株H9N2亞型禽流感病毒的毒力及HA基因的變異，從而為更好的預(yù)防控制H9亞型禽流

3、感病毒提供一定的理論基礎(chǔ)。
　　 試驗(yàn)一、H9亞型AIV的分離鑒定及生物學(xué)特性研究
　　 本試驗(yàn)從臨床表現(xiàn)癥狀疑似禽流感的病死鴨臟器中分離得到4株H9亞型禽流感病毒，命名為SDWF1、SDWF2、SDWF3、SDWF4株。首先通過血凝特性的測定、雞胚致病力的測定、雞胚平均死亡時間的測定和1日齡雛雞腦內(nèi)接種指數(shù)測定等方法對10株禽流感H9亞型毒株的致病力進(jìn)行分析和比較。結(jié)果表明，從山東濰坊地區(qū)分離到的4株禽流感H9亞型毒株

4、的致病力不強(qiáng)，其HA效價在28～29之間，ELD50在10-6.25/0.2mL～10-7.69/0.2mL之間，其中SDWF2毒株的ELD50為10-7.69/0.2mL，表出較其它3株病毒強(qiáng)的致病力，其它3株病毒的ELD50在10-6.25/0.2mL～10-6.55/0.2mL之間。這4株病毒的雞胚平均死亡時間差異不大，在90.0h～105.0h之間。其中SDWF2毒株的雞胚平均死亡時間最短為90.0h，說明該病毒的致病力較強(qiáng)；而

5、其他病毒的雞胚平均死亡時間都在90h以上，說明它們的致病力較弱。攻毒雞胚孵化出的雛雞和攻毒雛雞均出現(xiàn)了明顯的剖檢癥狀。
　　 試驗(yàn)二、4株H9亞型AIVHA基因克隆測序及序列分析
　　 本研究采用RT-PCR方法成功擴(kuò)增出了4株H9亞型AIV的HA基因片段。序列分析結(jié)果表明，擴(kuò)增獲得的基因片段長度為1003bp。核苷酸和氨基酸序列同源性分析表明，這4株毒株彼此關(guān)系密切，同源性在93.7％以上，與山東省2003年分離的H9