寧夏靈武白芨灘國家級(jí)自然保護(hù)區(qū)苦豆子內(nèi)生真菌多樣性及其抑菌活性物質(zhì)研究.pdf

1、植物內(nèi)生真菌普遍存在于目前發(fā)現(xiàn)的各種陸生及水生植物中，其多樣性受多種因素的影響。不同的區(qū)域或位點(diǎn)、氣候條件、植被等均可影響內(nèi)生真菌類群的多樣性。研究發(fā)現(xiàn)，藥用植物中蘊(yùn)含著大量的有益內(nèi)生真菌，這些內(nèi)生真菌與宿主之間具有緊密的生態(tài)關(guān)系，其產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物在醫(yī)藥、植物病蟲害生物防治等方面的用途逐漸增大，成為尋找新的天然活性產(chǎn)物的重要方向。本文以寧夏干旱荒漠區(qū)重要的沙生藥用植物苦豆子為研究對(duì)象，進(jìn)行了內(nèi)生真菌的分離鑒定、多樣性分析以及抑菌高活

2、性菌株的篩選研究，結(jié)果如下：
　　 1、從采自寧夏干旱荒漠區(qū)的6種沙生藥用植物苦豆子(Sophora alopecuroides L.)、老瓜頭(Cynanchum komarovii)、膿瘡草(Panzeria alaschanica)、甘草(Glycyrriza uralensia)、沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)、乳漿大戟(Euphorbia esula)中共分離內(nèi)生真菌449株。以根部最多，

3、其次莖部，葉部最少。合并形態(tài)相同分離物，苦豆子(S.alopecuroides L.)中分離屬最多，為16個(gè)屬。除無孢菌外，鐮孢霉屬(Frusarium)為6種沙生藥用植物內(nèi)生真菌共有屬，匐柄霉屬(Stemphylium)、短梗霉屬(Aureobasidium)、芽枝孢屬(cladosporium)、莖點(diǎn)霉屬(Phoma)和毛殼菌屬(Chaetomium)僅在苦豆子中分布。
　　 2、從寧夏靈武白芨灘國家級(jí)自然保護(hù)區(qū)5個(gè)樣區(qū)采集

4、的野生苦豆子植株中共分離出內(nèi)生真菌214株，根部分離內(nèi)生真菌最多，占45.3％。不同樣區(qū)間，以苦豆子、甘草、白草、蒙古冰草、短花針茅等為主的沙生植被草原(Ⅱ和Ⅳ)，由于植被覆蓋度高(>50％)，伴生植被類型豐富，苦豆子內(nèi)生真菌感染率和分離率最高?？喽棺觾?nèi)生真菌群落相似系數(shù)最高的是以叢生小禾草小灌木等植被為優(yōu)勢(shì)種群的荒漠草原(Ⅰ)和以強(qiáng)旱生小灌木植被為優(yōu)勢(shì)種群的荒漠草原(Ⅲ)，兩者均以苦豆子為伴生植被，苦豆子內(nèi)生真菌群落相似系數(shù)CS值為0

5、.76，其它各樣區(qū)間苦豆子內(nèi)生真菌群落相似系數(shù)在0.50～0.72之間。
　　 3、用6種靶標(biāo)病原菌對(duì)214株苦豆子內(nèi)生真菌進(jìn)行初步拮抗真菌的篩選，有167株(占78.0％)苦豆子內(nèi)生真菌表現(xiàn)出不同程度的抑菌活性，其中樣區(qū)Ⅴ拮抗菌株數(shù)比例最高，達(dá)97.5％，其次是樣區(qū)Ⅰ，為89.4％，最低為樣區(qū)Ⅲ，僅為64.7％。拮抗菌株抑菌帶從5mm～21mm不等，顯示出活性菌株的抑菌作用強(qiáng)度不同。其中BKDF3菌株胞外分泌物的抑菌活性最為顯

6、著，對(duì)番茄枯萎病菌的抑菌帶寬度達(dá)到17.82mm，產(chǎn)生的抑菌物質(zhì)可以通過硫酸銨鹽析得到，表明抑菌物質(zhì)中含有蛋白質(zhì)。
　　 4、用薄層色譜法(thin layer chromatography，TLC)對(duì)64株具有抑菌活性的內(nèi)生真菌菌株進(jìn)行產(chǎn)喹諾里西啶堿菌株的篩選，并對(duì)其進(jìn)行初步鑒定。結(jié)果表明5株苦豆子內(nèi)生真菌菌株發(fā)酵液層析帶與苦豆子總堿的層析帶遷移率相當(dāng)，初步判定為產(chǎn)喹諾里西啶生物堿菌株，經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定，5株菌株分屬于卵形孢霉屬(