喹賽多在蛋鴨的田間試驗.pdf

1、喹賽多是喹噁啉類的一個新品種，具有廣譜抗菌、高效促生長和提高飼料利用率的作用。大量研究證明，喹賽多可以有效的促進豬、雞、魚等動物的生長，并與同類藥物相比毒性小、食品安全性好，具有廣闊的開發(fā)應(yīng)用前景。目前，尚無喹賽多在蛋鴨上的研究報道。本試驗通過喹賽多在蛋鴨的長期飼養(yǎng)試驗，考察喹賽多對蛋鴨的生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的影響，確定喹賽多在蛋鴨的最佳使用劑量和時程；檢測喹賽多對蛋鴨病原菌攜帶種類和數(shù)量的影響，確定臨床有效量；建立鴨蛋和蛋鴨可食性組織中喹

2、賽多及其代謝物的高效液相色譜檢測方法，考察各化合物在鴨蛋和蛋鴨可食性組織中的殘留消除規(guī)律，制定喹賽多在蛋鴨的殘留控制標準；并結(jié)合喹賽多對鴨常見病原菌的體外抑菌試驗等指標評價喹賽多對蛋鴨的有效性與安全性，從而為喹賽多在臨床上的合理應(yīng)用提供理論依據(jù)，保障人類的食品安全。
　　 1.喹賽多對鴨常見病原菌的體外抗菌活性研究
　　 采用微量肉湯稀釋法測定喹賽多對5種13株鴨常見病原菌的體外抗菌活性，主要參考標準為臨床實驗室標準化研

3、究所(CLSI)制定的相關(guān)文件。結(jié)果表明，喹賽多對鴨常見病原菌有較好的抑菌作用，對鴨金黃色葡萄球菌和鴨多殺性巴氏桿菌抑菌活性最明顯，其最小的抑菌濃度(MIC)分別為32和4～8μg/mL，對其他細菌的MIC均在64～128μg/mL之間。除巴氏桿菌外，喹賽多的抑菌效果與鹽酸金霉素相當，而對巴氏桿菌其抑菌效果略差于鹽酸金霉素，但對大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、巴氏桿菌和鴨疫里氏桿菌的抑菌效果明顯的優(yōu)于桿菌肽鋅和喹烯酮。故喹賽多是一種

4、活性較高的抑菌劑，可推薦用作鴨常見病原菌感染的預(yù)防藥物。
　　 2.喹賽多在蛋鴨的長期飼養(yǎng)試驗
　　 試驗選用39周齡江南Ⅱ號蛋鴨2160羽，隨機分為4個處理組，每組3個重復(fù)，每重復(fù)180羽?？瞻捉M飼喂不添加抗菌藥物的基礎(chǔ)日糧，喹賽多試驗組飼喂含喹賽多50、100和200mg/kg的加藥飼料。預(yù)試7天后轉(zhuǎn)入正式試驗，試驗期為90天。試驗期間，每日定時記錄每重復(fù)組的產(chǎn)蛋個數(shù)、蛋重和死淘情況；每周結(jié)算一次耗料量。計算平均日耗

5、料、產(chǎn)蛋率、產(chǎn)蛋量、料蛋比、平均蛋重和死淘率。在試驗中期和后期，每試驗組隨機取30枚鴨蛋，進行蛋品質(zhì)的檢測，測定指標主要有蛋重、蛋比重、蛋殼厚度、蛋形指數(shù)、蛋黃比率、蛋黃顏色及哈氏單位；從每試驗組隨機取10羽蛋鴨，翼靜脈采血，測定血液生理生化指標。在試驗結(jié)束后，從每試驗組隨機取10羽蛋鴨宰殺，取動物的心臟、肝臟、脾臟、肺臟和腎臟，進行組織病理學(xué)的檢查；從每試驗組隨機取10羽蛋鴨，無菌條件下取蛋鴨的盲腸，肝臟，腎臟，脾臟，腦，心血和糞便，

6、分離大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌、金黃色葡萄球菌和鴨疫里氏桿菌等鴨常見病原菌。
　　 喹賽多對生產(chǎn)性能的影響：在整個試驗期間(39～50wk)，50～200mg/kg喹賽多組對蛋鴨生產(chǎn)性能均有不同程度的影響。產(chǎn)蛋率：各組中100mg/kg喹賽多組的產(chǎn)蛋率最高(91.63%)，比空白組提高2.56%(P<0.05)，其次為50mg/kg喹賽多組，比空白組提高2.31%(P>0.05)，200mg/kg喹賽多組與空白組相當。產(chǎn)蛋量：

7、各組中100mg/kg喹賽多組的產(chǎn)蛋量最高(61.78g)，比空白組提高3.31%，其次為50mg/kg喹賽多組和200mg/kg喹賽多組，分別比空白組提高2.90%和0.90%，但差異不顯著。蛋重：各組中100mg/kg喹賽多組的蛋重最高(67.44g)，比空白組提高0.76%，其次為50mg/kg和200mg/kg喹賽多組，分別比空白組提高0.60%和0.43%，但差異不顯著。料蛋比：各組中100mg/kg喹賽多組的料蛋比最低(2.

8、77)，比空白組下降3.15%，其次為200mg/kg和50mg/kg喹賽多組，分別比空白組下降2.45%和2.14%，但差異不顯著。這些結(jié)果表明，在整個試驗期間，蛋鴨日糧中添加50～200mg/kg喹賽多均可以有效的提高產(chǎn)蛋高峰期蛋鴨的產(chǎn)蛋率，增加產(chǎn)蛋量，降低料蛋比，改善飼料報酬，其中喹賽多最佳添加劑量為100mg/kg，最佳添加時間為90天。
　　 喹賽多對蛋品質(zhì)的影響：在整個試驗期間(39～50wk)，50～200mg/k

9、g喹賽多組對蛋鴨蛋品質(zhì)均有不同程度的影響，其中100mg/kg喹賽多組效果最佳。在試驗中期(44wk)，100mg/kg喹賽多組的蛋重比空白組提高9.10%(P<0.01)，哈氏單位提高13.34%(P<0.01)，蛋黃顏色提高6.89%，蛋殼厚度提高8.70%(P<0.01)。在試驗后期(50wk)，100mg/kg喹賽多組的蛋重比空白組提高6.84%(P<0.01)，哈氏單位提高1.73%，蛋黃顏色提高21.72%(P<0.01)，

10、蛋殼厚度提高9.33%(P<0.01)。喹賽多對蛋鴨的蛋形指數(shù)，蛋黃比率和蛋比重無明顯影響(P>0.05)。這些結(jié)果顯示，在日糧中添加50～200mg/kg喹賽多可有效提高蛋鴨的蛋重、哈氏單位、蛋黃顏色和蛋殼厚度。
　　 喹賽多對血液生理生化指標的影響：在整個試驗期間(39～50wk)，喹賽多各劑量組對蛋鴨的血液生理生化指標無明顯變化，均在該動物正常生理參考范圍內(nèi)。在血液生理指標的檢測中，喹賽多組的紅細胞數(shù)量和紅細胞壓積高于空白

11、組(P>0.05)，這與喹賽多可提高蛋鴨的產(chǎn)蛋率和改善蛋鴨的蛋黃顏色結(jié)果一致。在血液生化指標的檢測中，100和200mg/kg喹賽多組的鉀離子分別比空白組升高了1.34%和4.01%，但無顯著性差異，病理學(xué)檢查蛋鴨的腎臟，也未見微觀的毒性反應(yīng)。另外，喹賽多組的血糖(GLU)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(AST)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(ALT)較空白組也有所升高(P>0.05)，較高水平的GLU、AST和ALT可以促進蛋鴨對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，這與動物產(chǎn)蛋率的增加呈正

12、相關(guān)。
　　 喹賽多對蛋鴨體內(nèi)病原菌攜帶種類和數(shù)量的影響：喹賽多對盲腸中大腸桿菌數(shù)量的影響：50～200mg/kg喹賽多可有效地減少盲腸中大腸桿菌的數(shù)量，其中50、100和200mg/kg喹賽多組分別比空白組降低了9.1%(P>0.05)、12.5%(P<0.01)和11.2%(P<0.05)。它們之間存在劑量效應(yīng)關(guān)系，隨著劑量的增加，大腸桿菌的數(shù)量減少的越多，當劑量達到200mg/kg時，大腸桿菌的數(shù)量較100mg/kg喹賽多

13、組有所上升，但也明顯低于空白組。喹賽多對其它病原菌的影響：50～200mg/kg喹賽多對蛋鴨體內(nèi)其它病原菌(沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、巴氏桿菌和鴨疫里氏桿菌)也存在不同程度的抑制作用，并也呈現(xiàn)出劑量效應(yīng)關(guān)系，當喹賽多劑量達到200mg/kg時，蛋鴨體內(nèi)已分離不到沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、巴氏桿菌和鴨疫里氏桿菌。說明50～200mg/kg喹賽多可以有效的抑制蛋鴨體內(nèi)的常見病原菌。
　　 3.喹賽多在鴨蛋和蛋鴨可食性組織中的殘留消除

14、研究
　　 殘留檢測方法的建立：通過對樣品前處理及液相色譜條件的優(yōu)化，確定最佳條件，建立了喹賽多及其六種主要代謝物在鴨蛋和蛋鴨可食性組織中的高效液相色譜殘留檢測方法。鴨蛋(蛋白和蛋黃)：先用2%偏磷酸20%乙腈40%甲醇提取，再用乙酸乙酯/三氯甲烷(35:65，v/v)混合液反萃，再經(jīng)HLB固相萃取小柱進一步凈化，高效液相色譜梯度洗脫分離，320nm紫外波長測定。蛋鴨可食性組織：先用1%偏磷酸10%乙腈50%甲醇提取，經(jīng)HLB固

15、相萃取小柱凈化濃縮，再用三氯甲烷反萃HLB柱的洗脫液，達到進一步除雜的效果，用HPLC在320nm紫外波長下測定。結(jié)果顯示，鴨蛋中，Cyx、Cy1、Cy2、Cy6和Cy12在蛋白中的最低定量限(LOQ)為16μg/kg，Cy9和Cy4分別為8μg/kg和32μg/kg；Cyx、Cy1、Cy2、Cy6、Cy9和Cy12在蛋黃中的LOQ為16μg/kg，Cy4為32μg/kg。蛋鴨可食性組織中，Cy1、Cy2、Cy6和Cy12在肝臟、腎臟、

16、肌肉和皮脂中的LOQ均為20μg/kg；Cy9在腎臟、肌肉和皮脂中為10μg/kg，在肝臟中為20μg/kg；Cyx在肌肉中為10μg/kg，在其它三種組織中均為20μg/kg；Cy4在四種組織中均為40μg/kg。結(jié)果表明，喹賽多及其六種主要代謝物在鴨蛋蛋白和蛋黃中的最低定量限在8μg/kg～32μg/kg之間，在添加不同定量限濃度水平上，平均回收率介于64.9%～80.1%之間，變異系數(shù)≤9.3%；喹賽多及其六種主要代謝物在蛋鴨可食

17、性組織中的最低定量限在10μg/kg～40μg/kg之間，在添加不同定量限濃度水平上，平均回收率介于63.4%～79.8%之間，變異系數(shù)≤10.5%。
　　 殘留消除研究：43周齡健康江南Ⅱ號蛋鴨連續(xù)飼喂100mg/kg喹賽多20天后，檢測喹賽多及其代謝物在鴨蛋和蛋鴨可食性組織中的殘留量。停藥當天(0d)，蛋白和蛋黃中均只檢出了Cy4，停藥1d，蛋白和蛋黃中的Cy4均降至最低定量限以下。組織中，停藥6h，肝臟中檢測到了六種化合物

18、(Cyx，Cy1，Cy2，Cy4，Cy6，Cy12)，腎臟中檢測到了五種化合物(Cyx，Cy1，Cy4，Cy6，Cy12)，肌肉中檢測到了三種化合物(Cyx，Cy1，Cy4)，脂肪中只檢測到了一種化合物Cy4。停藥5d，肝臟、肌肉和脂肪中已檢測不到任何化合物，只有腎臟中檢測到了一種化合物Cy1。因Cy1在腎臟中消除最慢，殘留持續(xù)時間最長，故提示喹賽多在蛋鴨的靶組織可能是腎臟，殘留標識物可能是Cy1。
　　 綜上所述，本課題參考我