扇貝養(yǎng)殖海區(qū)浮游生物和大型海藻攜帶AVNV的檢測(cè)及浮游生物多樣性分析.pdf

1、櫛孔扇貝在我國(guó)海水養(yǎng)殖業(yè)中占有重要地位，給我國(guó)北方沿海地區(qū)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)效益。但自20世紀(jì)90年代以來(lái)櫛孔扇貝大規(guī)模死亡在我國(guó)北方養(yǎng)殖海區(qū)連年暴發(fā)，造成了不可挽回的嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。已有的研究表明，AVNV是導(dǎo)致櫛孔扇貝在養(yǎng)殖中后期大量死亡的直接病原，但是有關(guān)該病原流行傳播方式仍不清楚。為了研究浮游生物攜帶AVNV的可能性，本論文采用FQ-PCR檢測(cè)技術(shù)，從2008年至2009年對(duì)青島沙子口和榮成桑溝灣2個(gè)扇貝養(yǎng)殖海區(qū)多個(gè)月份浮游生物及大型

2、海藻攜帶AVNV的情況進(jìn)行了定量檢測(cè)，目的在于弄清浮游生物和大型海藻攜帶AVNV的情況及其季節(jié)性變化，以期為認(rèn)識(shí)AVNV的傳播和制定預(yù)防控制措施提供理論依據(jù)。
　　 本研究從2009年5月至11月，分別從青島沙子口和榮成桑溝灣兩個(gè)扇貝養(yǎng)殖海區(qū)定期采取50cm和300cm兩個(gè)水層水樣，經(jīng)25μm、3μm、0.22μm三個(gè)孔徑的濾膜分級(jí)過(guò)濾收集三個(gè)不同粒徑的浮游生物，利用熒光定量PCR技術(shù)對(duì)浮游生物攜帶AVNV的情況進(jìn)行了定量檢測(cè)。

3、結(jié)果表明兩個(gè)海區(qū)浮游生物樣品均檢測(cè)到AVNV，檢測(cè)的AVNV數(shù)量也均在8月份達(dá)到峰值，沙子口海區(qū)每升海水中浮游生物攜帶4.11×106拷貝的AVNV，桑溝灣海區(qū)浮游生物攜帶1.49×105拷貝的AVNV。3個(gè)粒徑浮游生物組分?jǐn)y帶AVNV的數(shù)量從低到高依次為0.22μm-3μm粒徑組分、3μm-25μm粒徑組分和大于25μm粒徑組分。但2個(gè)水層(50cm和300cm)浮游生物攜帶AVNV的數(shù)量則沒(méi)有顯著差異。這一結(jié)果說(shuō)明養(yǎng)殖海區(qū)浮游生物可

4、以攜帶AVNV，攜帶AVNV的數(shù)量存在顯著的季節(jié)性差異，不同大小的浮游生物攜帶AVNV的數(shù)量也顯著不同。結(jié)合扇貝攝食浮游生物的特點(diǎn)，本研究結(jié)果表明，扇貝在養(yǎng)殖期間通過(guò)濾食攜帶病毒的浮游餌料而感染AVNV是可能的，海區(qū)浮游生物可能是導(dǎo)致AVNV流行的重要傳播媒介。
　　 2008年-2009年從青島沙子口海區(qū)14個(gè)月隨機(jī)采集的10種大型海藻（孔石莼Uiva pertusa、滸苔Enteromorpha prolifera、海膜Ha

5、lymenia floresia、細(xì)毛石花菜Gelidium crinale、緣管滸苔Enteromorpha Linza、舌形蜈蚣藻Grateloupialivida、扁江蘺Gracilaria textorii、節(jié)夾藻Lomentaria Lyngb、剛毛藻Cladophora、馬尾藻Sargassum）中有7種（孔石莼Uiva pertusa、滸苔Enteromorpha prolifera、海膜Halymenia floresi

6、a、細(xì)毛石花菜Gelidium crinale、緣管滸苔EnteromorphaLinza、扁江蘺Gracilaria textorii、剛毛藻Cladophora)檢測(cè)到病毒，帶毒樣品占到檢測(cè)樣品總數(shù)的55.56％，其中12份孔石莼樣品有11份樣品檢測(cè)到病毒，2009年8月25日采集的孔石莼樣品攜帶病毒數(shù)量最高，為7.68×104/0.1g。從榮成桑溝灣海區(qū)采集的14種大型海藻樣品（孔石莼Uiva pertusa、滸苔Enteromo

7、rpha prolifera、海膜Halymenia floresia、細(xì)毛石花菜Gelidium crinale、舌形蜈蚣藻Grateloupia livida、節(jié)夾藻Lomentaria Lyngb、馬尾藻Sargassum、江蘺Gracilaria confervoides、叉枝藻Gymnogongrus flabelliformis、石花菜Gelidium amansii、龍須菜Gracilaria lemaneiformis、

8、金膜藻Chrysymenia Wrightii、蜈蚣藻Grateloupia filicina、海帶Laminaria Japonica)中有3種（孔石莼Uivapertusa、海膜Halymenia floresia、馬尾藻Sargassum）檢測(cè)到病毒，帶毒樣品占到檢測(cè)樣品總數(shù)量的20.83％，其中2009年7月采集的孔石莼樣品攜帶病毒數(shù)量最高，為3.06×103/0.1g。這一結(jié)果說(shuō)明部分大型海藻均可攜帶AVNV，關(guān)于大型海藻攜帶

9、AVNV在該病原流行傳播中的作用還有待進(jìn)一步研究。
　　 為分析扇貝養(yǎng)殖海區(qū)真核浮游生物種類和豐度，以實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的9種餌料微藻為對(duì)照，PCR擴(kuò)增9個(gè)月份青島沙子口扇貝養(yǎng)殖海區(qū)真核浮游生物18SrDNAV1～V3區(qū)的高變區(qū)，并采用DGGE技術(shù)對(duì)擴(kuò)增片段進(jìn)行了分析，結(jié)果表明，擴(kuò)增序列長(zhǎng)560bp，DGGE分析可將不同藻種分離開(kāi)。DGGE分析沙子口養(yǎng)殖區(qū)9個(gè)月份真核微生物的種類多樣性，結(jié)果從9個(gè)月份2米深的海水中總共擴(kuò)增出38類譜帶，

10、其中9個(gè)月共有譜帶3條，占總數(shù)的7.69％，不同月份的特征性譜帶11個(gè)，占總譜帶數(shù)的28.2％。不同月份水樣中的譜帶數(shù)存在顯著不同，香農(nóng)多樣性指數(shù)為0.4632。相似性分析表明，09年3和4月、08年5和6月份以及2008年10和12月份養(yǎng)殖海區(qū)真核微生物種類各自相近?；诓煌路菟畼游⑸锓N類進(jìn)行UPGMA聚類分析，結(jié)果表明，2008年5、6、8月份和2009年1、2、3、4月分別聚為一支，顯示取樣時(shí)間相近的月份微生物種類相似度最高。