銀鯽線粒體基因組序列分析及ENU誘變銀鯽F1代遺傳差異分析.pdf

1、黑龍江省方止縣雙風水庫的銀鯽（以下稱方正銀鯽）以個體大、生長快、適應性強而聞名，并作為黑龍江銀鯽的優(yōu)良群體被移植到全國二十余省市，受到人們的普遍歡迎。因此，開展方正銀鯽的生物學研究，對發(fā)展鯽魚增養(yǎng)殖，培育新品種是很有必要的。方正銀鯽(Carassius autatus gibeblio Bloch)是以雌核發(fā)育為主、兩性融合為輔的兩性型種群，一年性成熟，因此利用常規(guī)選育技術，獲得新種的周期非常短，是一種非常好的育種材料。但其種內的遺傳同

2、質性非常高，要想獲得在生產性能上有顯著差別的養(yǎng)殖新品種常規(guī)選育的方法很難達到預期的效果，且工作量也比較大。因此，鑒于ENU的誘變特點，本研究利用方正銀鯽所具有的特殊生殖方式和繁殖周期短的特點，對繁育親本進行了ENU浸泡誘變并繁殖F1代，這樣通過一代的選育不僅可以固定這些誘變位點，而且還可以快速獲得純種，對其它養(yǎng)殖魚類的育種工作也是有借鑒意義的。本論文研究的主要結果如下：
　　 1.銀鯽線粒體全基因組序列分析通過對方正銀鯽雌雄魚線

3、粒體DNA進行全序列測序得到銀鯽雌雄魚線粒體基因組全長分別為：16582bp,16581bp，兩者的線粒體基因組長度相差1bp，基因的排列次序一致，類似于其它鯉科魚類。方正銀鯽線粒體DNA有37個基因（2個rRNA基因、22個tRNA基因和13個蛋白質編碼基因）和1個非編碼區(qū)（D-Loop區(qū)）。L鏈上僅編碼9個基因（tRNA-Gln,tRNA-Ala,tRNA-Asn,RNA-Cys,tRNA-Tyr,tRNA-Ser,NADH6,tR

4、NA-Glu,tRNA-Pro），其余的基因均有H鏈編碼。在線粒體基因組中有10處基因重疊現象，共28bp；有15或16處基因間隔，總間隔序列長度70bp-73bp。13個蛋白編碼基因中有3個蛋白編碼基因（COXⅡ,ND4和Ctb）含有不完全終止密碼子(T),ND2、ATPase8、ND3和ND6終止密碼分別為TAG,其它的都為TAA。22個tRNA中除tRNA-Ser2缺少”DHU＝臂，為二葉草結構外，其余21個tRNA基因的二級結構

5、全部屬于典型的三葉草結構。
　　 2.ENU誘變銀鯽F1代線粒體基因組與正常銀鯽的比較研究通過對6尾（♂3，♀3）誘變組銀鯽和2尾（♂1，♀1）對照組銀鯽線粒體DNA進行全序列測序比對分析發(fā)現6尾誘變組銀鯽有4尾魚的mtDNA發(fā)生點突變率達到2％，這些突變位點覆蓋整個mtDNA，主要集中在13個蛋白質編碼基因、12SrRNA基因、16SrRNA基因和D-Loop控制區(qū)。同時在突變位點相對較多的NADHI和NADH2部分序列設計引

6、物，對誘變組55尾(♀23,♂32)和對照組17尾♀9,♂8)線粒體DNA進行PCR擴增，測序，測序結果比對發(fā)現，對照組雌魚雄魚均未發(fā)生變化，誘變組23尾雌魚僅有4尾發(fā)生堿基變化，32尾雄魚中有17尾發(fā)生堿基變化，誘變組的平均誘變率為38％，雄魚的誘變率大于雌魚的誘變率。
　　 3.ENU誘變銀鯽F1代AFLP指紋圖譜分析本論文采用9對AFLP引物組合對誘變銀鯽子代30尾（♀14,♂16），對照組子代25尾（♀14,♂11）進行