杯冠屬線蟲的分子鑒定及系統(tǒng)發(fā)育學(xué)研究.pdf

1、隨著人們對寄生蟲病的不斷研究和認(rèn)識(shí)，發(fā)現(xiàn)圓線蟲在馬屬動(dòng)物體內(nèi)的寄生十分普遍，以宿主的大腸為主要寄生器官，以消化液等作為主要的營養(yǎng)來源。圓線蟲首先削弱動(dòng)物個(gè)體的免疫能力，然后引起一系列的其它病癥反應(yīng)，嚴(yán)重的會(huì)導(dǎo)致染病個(gè)體的死亡，所以嚴(yán)重威脅著畜牧養(yǎng)殖業(yè)的生產(chǎn)。因此，圓線蟲的預(yù)防和治療顯得尤為重要，而傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)方法有時(shí)不能準(zhǔn)確鑒定致病圓線蟲，系統(tǒng)的、全面的分析成為圓線蟲調(diào)查研究的方向。目前，國外學(xué)者對圓線蟲的研究較為深入，已經(jīng)有了較多的資

2、料和數(shù)據(jù)，然而國內(nèi)的研究情況，卻并不容樂觀。在國內(nèi)，更多的僅限于形態(tài)學(xué)方面的研究，系統(tǒng)性的研究還相對缺乏，特別是在分子生物學(xué)研究方面，存在著許多的空白。本論文首次對4種杯冠屬線蟲（采自河南新鄉(xiāng)地區(qū)驢體內(nèi)）的形態(tài)及分子系統(tǒng)發(fā)育學(xué)方面進(jìn)行研究。
　　本研究以寄生在驢體內(nèi)的4種杯冠屬線蟲（小杯杯冠線蟲（Cylicostephanuscalicatus），高氏杯冠線蟲（C.goldi），長傘杯冠線蟲（C.longiburs）和微小杯冠線蟲

3、(C.minutus)）為研究對象，通過光鏡觀察和測量，并利用掃描電鏡對蟲體的體表結(jié)構(gòu)做進(jìn)一步的觀察和描述，為杯冠屬線蟲的分類提供更加可靠的依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)觀測到的蟲體形態(tài)結(jié)構(gòu)，與以往研究記載相比較基本上是一致的。
　　通過對研究材料的DNA提取和序列測定，結(jié)果可知:杯冠屬的4種線蟲共獲得6條rDNA-ITS序列(ITS+5.8S)，通過多序列比對分析發(fā)現(xiàn)，全序列總長度為740-842bp，其中5.8S區(qū)堿基完全一致，長度均為153b

4、p;所含變異位點(diǎn)共93個(gè)，占總位點(diǎn)13.53％-15.84％，簡約信息位點(diǎn)共65個(gè)，占總位點(diǎn)9.4％-11.07％;其中ITS1區(qū)長為367-372bp，變異位點(diǎn)為32個(gè)，簡約信息位點(diǎn)為23個(gè);ITS2區(qū)長為215-320bp，變異位點(diǎn)為61個(gè)，簡約位點(diǎn)為42個(gè)，ITS2區(qū)相比ITS1區(qū)變異性更大。結(jié)合從數(shù)據(jù)庫中獲得的該屬內(nèi)5個(gè)種的6條序列，ITS-1區(qū)和ITS-2區(qū)的G+C含量分別為:47.70％-48.66％和38.14％-40.7

5、8％。所測得的6條序列的經(jīng)過兩兩比對分析得知，種間差異性（ITS1和ITS2）計(jì)算結(jié)果為:1.080％-7.77％和3.75％-48.16％。因此，該屬種間的ITS1序列差異性較小，而ITS2序列的差異性較大;種內(nèi)差異性結(jié)果為:0.00-0.27％和0.31-0.47％，由此可見，ITS序列的種內(nèi)差異非常小。其中微小杯冠線蟲比較特殊，與其它種類線蟲的種間差異（6.43-7.77％和46.63-48.16％）明顯大于其它各種間差異（2.1

6、7-1.08％和3.75-9.40％）。最后以馬圓線蟲為外群，結(jié)合Genebank中取得已記載的所有杯冠屬線蟲，共計(jì)13條序列，通過MegaS.0作遺傳距離分析，構(gòu)建MP和NJ發(fā)育樹。結(jié)果顯示，MP和NJ樹的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)完全一致，共分為兩大支，這兩大支又各自有自己的小支分布。微小杯冠線蟲在基部單獨(dú)聚為一支，其他種類聚為一支，這說明微小杯冠線蟲與其他種類的親緣關(guān)系比較遠(yuǎn)，其它四種線蟲的關(guān)系較近。而從其它四種線蟲聚集情況看可知，與長傘杯冠線蟲的