克拉瑪依滲油與采油污染區(qū)細菌多樣性研究.pdf

1、土壤中存在著大量微生物，與土壤環(huán)境相互作用形成了穩(wěn)定的生態(tài)系統(tǒng)，并在物質循環(huán)、土壤凈化等方面起著重要作用。當土壤微生物所依賴生長的環(huán)境受到污染時，一方面利用環(huán)境中的有機營養(yǎng)物質，另一方面同時與生態(tài)環(huán)境中的有機營養(yǎng)物質以及其他的生物物質相互作用形成一個較為穩(wěn)定的微生態(tài)系統(tǒng)。本文以準噶爾盆地西北緣的克拉瑪依采油滲油污染區(qū)的石油污染土壤為研究對象，周邊的非污染樣地為對照，將傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法與DNA指紋圖譜技術相結合，闡述了新疆克拉瑪依采油滲油污

2、染區(qū)的石油污染土壤細菌群落結構及動態(tài)變化。
　　在非培養(yǎng)方法中，對污染樣地的土壤微生物總DNA提取之前先對土樣進行一定的預處理，再進行三種提取方法的比較優(yōu)化，結果表明實驗室改進法DNA產(chǎn)率最高，純化后可以有效的去除土壤里的石油烴類污染。①本實驗采用嵌套式PCR，該方法能夠有效的提高擴增的靈敏度，通過PCR-DGGE技術分別對污染樣地和對照樣地的不同季節(jié)和不同深度土壤樣品16SrDNA的V3區(qū)進行電泳分離，DGGE圖譜使用Quant

3、ityone軟件對其做聚類分析，并對圖譜中的主要條帶回收做克隆測序。②DGGE圖譜各泳道相似性矩陣結果表明，同一季節(jié)的土樣在垂直分布上細菌群落結構相似性較高，而不同季節(jié)樣品細菌組成差異性顯著。③石油污染樣地中各泳道之間的相似性大部分上在50％以上，只有個別泳道間的相似性在45%左右，說明隨著季節(jié)的變化細菌種群的更替現(xiàn)象不明顯，同時也說明石油烴類物質對細菌的生長有一定的抑制作用，使微生物的種群趨于單一化。而對照樣地（非石油污染樣地）各泳道

4、的相似性系數(shù)較低，差異相對顯著，細菌群落隨季節(jié)變化明顯；說明石油烴類物質是影響克拉瑪依采油滲油區(qū)的重要因素。
　　石油污染土壤的可培養(yǎng)實驗中，通過16SrDNA的V3區(qū)的分子與傳統(tǒng)的形態(tài)學鑒定，初步篩選了14株細菌。對這14株細菌進行生物學特性的研究，經(jīng)牛肉膏液體培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)，測其OD值，依次獲得了各菌株的最適pH、最適生長溫度、耐鹽度及生長曲線。在此基礎上對各個菌株的生理生化特征進行分析，研究結果表明石油污染土壤可培養(yǎng)細菌結構