2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、實驗室規(guī)則,接觸到病原菌,一定要堅持無菌操作進實驗室穿上白大衣,離開時反折嚴禁飲食,也不要以手撫摸頭、面等部位若發(fā)生吸入菌液,割破手指等事故,必須報告老師接觸過菌液的吸管、玻片等器材,投入含有2~3%來蘇兒的容器內(nèi)實驗完畢,整理桌面,微生物實驗要求,做實驗后要認真完成實驗報告,所得結(jié)果必須真實記錄,浙江大學(xué)實驗報告,課程名稱: 實驗類型:

2、 實驗項目名稱: 學(xué)生姓名: 專業(yè): 學(xué)號:      同組學(xué)生姓名: 指導(dǎo)老師: 實驗地點: 實驗

3、日期: 年 月 日實驗?zāi)康暮鸵螅ū靥睿嶒瀮?nèi)容和原理(必填)主要儀器設(shè)備操作方法與實驗步驟實驗數(shù)據(jù)記錄和處理實驗結(jié)果與分析(必填)討論、心得,實驗一革蘭氏染色、細菌接種,實驗內(nèi)容,一,革蘭氏染色(操作)二,細菌接種平板劃線法(操作)斜面培養(yǎng)基接種法(操作)半固體培養(yǎng)基接種法/穿刺接種法(操作)液體培養(yǎng)基接種法(操作)細菌在液體、固體、半固體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象(示教),顯微鏡的使用和保護 -

4、-- 原理,油鏡與其他物鏡的不同是載玻片與物鏡之間不是隔一層空氣,而是隔一層油質(zhì)稱為油浸系。這種油常選用香柏油如果玻片與物鏡之間的介質(zhì)為空氣,稱為干燥系,當光線通過載玻片后,受折射發(fā)生散射現(xiàn)象,進入物鏡的光線顯然減少,這就降低了視野的照明度香柏油的折射率n=1.515,與玻璃n=1.52相近。當光線通過載玻片后,可直接通過香柏油進入物鏡而不發(fā)生折射,油浸沒物鏡 介質(zhì):空氣;香柏油,油鏡的識別,油鏡的鏡筒最長,透鏡直徑最小,上面刻有9

5、0倍或100倍或Oil等,油鏡的使用,先按低倍鏡到高倍鏡的操作步驟找到物像,并將觀察部分移至視野的中央。 轉(zhuǎn)動旋轉(zhuǎn)盤,使高倍鏡移向一側(cè),在蓋玻片上滴一滴香柏油,然后將油鏡對準通光孔,使油鏡下端與香柏油接觸(注意操作動作要慢,以免壓碎玻片或損壞鏡頭)。 從目鏡內(nèi)觀察,微微上下轉(zhuǎn)動細調(diào)節(jié)器,至視野內(nèi)出現(xiàn)清晰的物像時為止。 油鏡使用完畢后,必須用拭鏡紙沾少許二甲苯將油鏡上的香柏油擦凈,并用干的拭鏡紙檫去二甲苯。顯微鏡用畢后,升高鏡簡,

6、取下玻片標本,轉(zhuǎn)動旋轉(zhuǎn)盤,使每個物鏡都不對準通光孔,再下降鏡筒,使物鏡接近載物臺,將聚光鏡降下,最后放回櫥內(nèi)。,革蘭染色法,由丹麥C.Gram于1884年創(chuàng)立,是細菌學(xué)中很重要的鑒別染色法,通過此法染色,可將細菌鑒別為革蘭陽性菌(G+)和革蘭陰性菌(G-)兩大類細菌細胞壁的結(jié)構(gòu),革蘭染色法--原理,G+菌胞壁結(jié)構(gòu)致密,肽聚糖層厚,脂質(zhì)含量少,乙醇不易透入。同時乙醇使細胞壁脫水形成一道屏障,阻止結(jié)晶紫—碘復(fù)合物從胞內(nèi)滲出,故細菌仍保留初

7、染時的紫色。G-菌胞壁結(jié)構(gòu)較為疏松,肽聚糖層很薄,外膜含大量脂質(zhì),易被乙醇溶解,致使細胞壁通透性變大,使結(jié)晶紫--碘復(fù)合物被乙醇溶解析出而脫色,故細菌呈復(fù)染時的紅色,革蘭染色方法,初染:滴加結(jié)晶紫染液,染1分鐘,水洗. 媒染:滴加盧戈氏碘液,作用1分鐘后,水洗. 脫色:加95%酒精2~3滴于涂片上,頻頻搖晃3~5秒鐘后,斜持玻片,使酒精流去;再滴加酒精,如此反復(fù)2~3次,直至流下的酒精無色或稍呈淡紫色時為止,約半分鐘。水洗復(fù)染:

8、滴加稀釋石炭酸復(fù)紅染1/2~1分鐘,水洗,待干,油鏡檢查. (紫碘酒紅、分分半半),革蘭染色結(jié)果 -- 陽紫陰紅,凡能固定結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物,而不易被酒精脫色,仍保留紫色,稱為革蘭陽性菌. 凡易能被酒精脫色,再經(jīng)復(fù)染成紅色的細菌,稱為革蘭陰性菌,仔細觀察(染色性,形態(tài),排列),繪圖,革蘭染色的意義,鑒別細菌:鑒別G+, G-,初篩標本選擇用藥致病物質(zhì)大多  G+ 外毒素,G- 內(nèi)毒素,細菌材料玻片標本制備,涂片-

9、-----干燥------固定涂片:先取一接種環(huán)生理鹽水放于載玻片的一端,左手持菌液試管,右手持接種環(huán),用接種環(huán)從試管培養(yǎng)液中挑取少許大腸桿菌或葡萄球菌培養(yǎng)物與鹽水混勻,涂成直徑約1厘米的涂片,涂片應(yīng)薄而均勻。干燥:涂片最好放置室溫中,待其自然干燥。固定:手執(zhí)玻片的一端標本面向上,在火焰外層較快地來回通過三次,約2~3秒,以玻片反面觸及皮膚,以不覺過分地燙為度。待放置冷卻后,進行染色。掌握無菌操作拔或塞試管帽時,應(yīng)將試管口通過

10、火焰略加燒灼;接種環(huán)使用前后應(yīng)在火焰上燒灼滅菌,固定的目的,① 殺死微生物,固定其細胞結(jié)構(gòu)② 保證菌體能牢固地粘附在載玻片上,以免水洗時被水沖掉③ 改變菌體對染料的通透性,一般死細胞原生質(zhì)容易著色。,細菌生長繁殖的條件,充足的營養(yǎng)物質(zhì)水,碳源,氮源,無機鹽,生長因子 合適的外界環(huán)境溫度酸堿度氣體滲透壓,培養(yǎng)基的類型,1.按照培養(yǎng)基的成分來分  (1)合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基的各種成分完

11、全是已知的各種化學(xué)物質(zhì)。這種培養(yǎng)基的化學(xué)成分清楚,組成成分精確,重復(fù)性強,但價格較貴,而且微生物在這類培養(yǎng)基中生長較慢。如高氏一號合成培養(yǎng)基、察氏(Czapek)培養(yǎng)基等?! ?2)天然培養(yǎng)基。由天然物質(zhì)制成,如蒸熟的馬鈴薯和普通牛肉湯,前者用于培養(yǎng)霉菌,后者用于培養(yǎng)細菌。這類培養(yǎng)基的化學(xué)成分很不恒定,也難以確定,但配制方便,營養(yǎng)豐富,所以常被采用。  (3)半合成培養(yǎng)基。在天然有機物的基礎(chǔ)上適當加入已知成分的無機鹽類,或在合成

12、培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加某些天然成分,如培養(yǎng)霉菌用的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。這類培養(yǎng)基能更有效地滿足微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需要。,2.按照培養(yǎng)基的物理狀態(tài)分 (1)固體培養(yǎng)基。是在培養(yǎng)基中加入凝固劑,有瓊脂、明膠、硅膠等。固體培養(yǎng)基常用于微生物分離、鑒定、計數(shù)和菌種保存等方面?!?2)液體培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)基中不加任何凝固劑。這種培養(yǎng)基的成分均勻,微生物能充分接觸和利用培養(yǎng)基中的養(yǎng)料,適于作生理等研究,由于發(fā)酵率高,操作方便,也常用于發(fā)酵工業(yè)。

13、 (3)半固體培養(yǎng)基。是在液體培養(yǎng)基中加入少量凝固劑而呈半固體狀態(tài)??捎糜谟^察細菌的運動、鑒定菌種和測定噬菌體的效價等方面。,3.按照培養(yǎng)基用途分: (1)加富培養(yǎng)基。是在培養(yǎng)基中加入血、血清、動植物組織提取液,用以培養(yǎng)要求比較苛刻的某些微生物。 (2)選擇性培養(yǎng)基。是根據(jù)某一種或某一類微生物的特殊營養(yǎng)要求或?qū)σ恍┪锢怼⒒瘜W(xué)抗性而設(shè)計的培養(yǎng)基。利用這種培養(yǎng)基可以將所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來?!?3)鑒別培養(yǎng)基。是

14、在培養(yǎng)基中加入某種試劑或化學(xué)藥品,使培養(yǎng)后會發(fā)生某種變化,從而區(qū)別不同類型的微生物。,一,平板劃線法(操作),,平板分區(qū)劃線,平板分區(qū)劃線,平板劃線法,是一種分離培養(yǎng)法,接種,,培養(yǎng),長出單個菌落,實驗步驟(平板劃線法),不要說話,嚴格無菌操作灼燒接種環(huán)后要冷卻取一環(huán)葡萄球菌或大腸桿菌劃線時用腕力,不要使接種環(huán)嵌入瓊脂各個分區(qū)要分明在培養(yǎng)皿底部貼標簽倒置培養(yǎng)以防止結(jié)晶水沖散細菌,二,斜面培養(yǎng)基接種法(操作),,斜面接種時的無

15、菌操作(1)接種滅菌 (2)開啟棉塞 (3)管口滅菌 (4)挑起菌苔 (5)接種 (6)塞好棉塞,實驗步驟(斜面接種法),用左手握住菌種管(葡萄球菌或大腸桿菌)和斜面培養(yǎng)基管,右手持接種環(huán)。用右手小指與手掌、小指與無名指分別拔出兩管的棉塞,將管口通過火焰滅菌。用接種環(huán)或接種針伸入菌種管內(nèi),挑取用來接種的菌苔。伸入斜面培養(yǎng)管內(nèi),先從斜面底部到頂端拖一條接種線,再自下而上蜿蜒劃線。接種完成之后,用火焰滅菌培養(yǎng)管口,并塞上棉塞,置于

16、37℃培養(yǎng)。,三,半固體培養(yǎng)基接種法/ 穿刺接種法(操作),穿刺接種法,實驗步驟(穿刺接種法),用左手握住菌種管(大腸桿菌或痢疾桿菌)和半固體培養(yǎng)管,右手持接種針。用右手小指與手掌、小指與無名指分別拔出兩管的棉塞,將管口通過火焰滅菌幾次。用接種針伸入菌種管內(nèi),挑取用來接種的菌苔。垂直刺入半固體中心,至近管底部,然后沿穿刺線退出。塞回棉塞,接種針重新滅菌。接種完畢,于37℃培養(yǎng)18—24h,觀察生長情況。,

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