淺談開展血小板抗體檢測項目的體會陳秉宇

1、2024/3/2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,1,淺談開展血小板抗體檢測項目的體會,陳秉宇浙江省人民醫(yī)院 輸血科,,,,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,2,一血小板抗體的簡介二開展血小板抗體檢測的目的和意義三血小板抗體檢測技術(shù)的簡述四 我院開展血小板抗體檢測的簡況五 如何應(yīng)對血小板抗體檢測陽性患者的體會六 血小板抗體檢測技術(shù)的應(yīng)用拓展,六大方面,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,3,一血小板抗體的簡介,

2、（一） 血小板抗體的內(nèi)涵：（二） 目前杭州省級醫(yī)院開展情況：（三）三點思考：（四）我們的觀點：,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,4,一血小板抗體的簡介,（一）血小板抗體的內(nèi)涵：1白細(xì)胞特異性和組織相容性抗體： 1）針對HLA-Ⅰ類抗原（HLA-A、HLA-B抗原和少量HLA-C抗原）的 HLA-Ⅰ類抗體（ 50-80% ）。 2）物價收費目錄：編碼—260000016 ；項目名稱—白細(xì)胞特

3、異性和組織 相容性抗體檢測；價格—90元/次。 3）現(xiàn)醫(yī)保限定支付范圍：無限定支付范圍；甲乙分類—甲。2血小板特異性和組織相容性抗體： 1）針對血小板特異性抗原（HPA抗原）的HPA抗體（17-25%）。 2）物價收費目錄：編碼—260000017 ；項目名稱—血小板特異性和組織 相容性抗體檢測；價格—90元/次。 3）現(xiàn)醫(yī)保限定支付范圍—限列入支付范圍的器官移植；甲乙分類—甲。參考文件：《

4、浙江省基本醫(yī)療保險醫(yī)療服務(wù)項目名稱》，浙江省勞動和社會保障廳，2005年版，第65頁?！墩憬♂t(yī)療服務(wù)價格手冊》（修訂版），浙江省物價局、浙江省衛(wèi)生廳，2010年12月版，第44頁。,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,5,一血小板抗體的簡介,（二） 目前杭州省級醫(yī)院開展情況： 1）血小板抗體檢測試劑注冊時間：國家藥監(jiān)局， 2011年4月3日。 2）我院開展時間：2011年5月26日；關(guān)

5、注和準(zhǔn)備時間 約10年。 3）現(xiàn)在杭州，浙一醫(yī)院、浙二醫(yī)院、邵逸夫醫(yī)院、浙江省中醫(yī)院、 浙江醫(yī)院等相繼開展。,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,6,一血小板抗體的簡介,（三）三點思考：思考1： 血小板特異性和組織相容性抗體：現(xiàn)醫(yī)保限定支付范圍—限列入支付范圍的器官移植，合理？思考2： 有關(guān)血型與配血的收費和醫(yī)保限定支付范圍，據(jù)了解沒有征求醫(yī)院輸血科專家的意見，

6、合理？ （據(jù)實地了解，浙江省血型與配血的收費是上海的1/3，江西1/3，且遠(yuǎn)低于西部地區(qū)，合理？ ）思考3： 社會在進(jìn)步，醫(yī)學(xué)在發(fā)展，管理部門和管理者的理念是否應(yīng)該更新和創(chuàng)新？以適應(yīng)社會和醫(yī)學(xué)發(fā)展的需要。,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,7,一血小板抗體的簡介,（四）我們的觀點： 1 患者和醫(yī)院的輸血安全重于泰山！ 2 輸注血小板是臨床治療的重要手段，今后 必將有更大發(fā)展。

7、 3 大行何不做小微？,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,8,二開展血小板抗體檢測的目的和意義,關(guān)于血小板抗體檢測項目的說明（2011-11-21） 院醫(yī)保辦： 因血小板抗體引起的臨床問題和疾病已引起全社會的嚴(yán)重關(guān)注，成為臨床亟待解決的問題。 血小板抗體檢測（或篩選）包括白細(xì)胞特異性和組織相容性抗體和血小板特異性和組織相容性抗體。 血小板抗體是引起

8、臨床非溶血性發(fā)熱性輸血反應(yīng)的最主要原因，非溶血性發(fā)熱性輸血反應(yīng)是臨床很常見的輸血不良反應(yīng)，文獻(xiàn)報道輸注紅細(xì)胞為2～6%，輸注血小板為20～30%，多次輸血患者高達(dá) 27％～63％，而非溶血性發(fā)熱性輸血反應(yīng)與血小板抗體密切相關(guān)，是影響臨床安全輸血的嚴(yán)重因素。血小板抗體的檢測對于預(yù)防和減少非溶血性發(fā)熱性輸血反應(yīng)非常有意義。,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,9,二開展開展血小板抗體檢測的目的和意義,血小板抗體是臨床引起免疫性血小板

9、輸注無效的最主要原因，文獻(xiàn)報道20～80%多次輸血的患者出現(xiàn)免疫性血小板輸注無效，血小板輸注無效會導(dǎo)致昂貴的血液和醫(yī)療資源的極大浪費，同時給患者造成較大的經(jīng)濟(jì)損失和身體損害。 血小板抗體的檢測是臨床診斷和治療與血小板抗體有關(guān)的疾病的重要依據(jù)。 鑒于血小板抗體對臨床的重要價值，為此該項目得到今年11月1日衛(wèi)生廳質(zhì)量檢查組的充分肯定。目前我省兄弟醫(yī)院已相繼開展。

10、 輸血科 2011年11月21日,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,10,三血小板抗體檢測技術(shù)的簡述,（一）原理（二）試劑組成（三）實驗前準(zhǔn)備（四）操作,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,11,三血小板抗

11、體檢測技術(shù)的簡述,（一）原理 1、基于固相紅細(xì)胞粘附實驗（SPRCA）原理。 2、反應(yīng)板中已包被抗血小板單克隆抗體，血小板懸液經(jīng) 離心洗滌后可在反應(yīng)孔底部形成血小板單層。 3、加入血清或血漿，在孔中經(jīng)過孵育后，若該血清或血漿中含有血小板抗體，則該抗體與反應(yīng)孔中的血小板單層結(jié)合，未結(jié)合的成分通過洗滌被去除。 4、加入抗人IgG及人IgG致敏紅細(xì)胞（指示紅細(xì)胞），經(jīng)離心后指示紅細(xì)胞通過抗人IgG的橋連與血小板單層上的

12、血小板抗體結(jié)合，因此陽性反應(yīng)為指示紅細(xì)胞平鋪在反應(yīng)孔底部表面。而陰性反應(yīng)為指示紅細(xì)胞在離心力的作用下聚集于反應(yīng)孔底部中央。,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,12,三血小板抗體檢測技術(shù)的簡述,（二）試劑組成1 低離子溶液（L.I.M）2 反應(yīng)版：在加入干燥劑的自封袋中密封保存；保存溫度為2～8℃。3 25*濃縮洗滌液4 抗人IgG5 陽性對照6 陰性對照7 指示紅細(xì)胞,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)

13、院 輸血科,13,（三）實驗前準(zhǔn)備（7）1 所有試劑平衡至室溫。2 25*濃縮洗滌液：使用前用蒸餾水以1：24稀釋成洗滌工作液。3 血小板抗體篩檢細(xì)胞： 1）為多人份O型健康者血小板，經(jīng)冷凍干燥制成。 2）使用前每支加生理鹽水500 μl ，室溫（18～25℃）靜置5分鐘 3）溶解后的濃度為100±20×109個/L 4）使用前應(yīng)充分

14、溶解和混勻 5）溶解后室溫可保存24小時，但不可4℃保存4 指示紅細(xì)胞： 1）指示紅細(xì)胞的表面已致敏人IgG抗體 2）使用前平衡至室溫（18～25℃） 3）加樣時應(yīng)充分搖勻 4）若指示紅細(xì)胞出現(xiàn)溶血、細(xì)菌污染、過期則不能使用 5）加樣時沒有充分搖勻或離心不充分，可導(dǎo)致假陽性結(jié)果,三血小板抗體檢測技術(shù)的簡述,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)

15、院 輸血科,14,5 制備血小板懸液： 1）抗體檢測采用3人份等比例混合O型血小板懸液 2）機(jī)采血小板需用生理鹽水進(jìn)行5-10倍稀釋后混合 3） 血小板懸液濃度約為50～150×109個/L 4）當(dāng)天采血8小時內(nèi)EDTA或枸櫞酸鈉抗凝血經(jīng)200 g離心10分鐘 后，取上層2/3富血小板血漿(PRP)可直接使用 5）交叉配血直接采

16、用供者血小板 6）血小板懸液應(yīng)貯存于塑料容器中，室溫可保存24小時，但不可 4℃保存6 待檢樣本：血清或血漿樣本應(yīng)新鮮，3000rpm離心5min以去除析出的纖維蛋白及其它有形成份，取上清進(jìn)行檢測。 7 打開水浴箱，將濕盒平衡至37℃。,（三）實驗前準(zhǔn)備（7）,三血小板抗體檢測技術(shù)的簡述,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,15,（四）操作1 依據(jù)檢測量取出反應(yīng)板條，標(biāo)記陽性對照、陰性對照及待

17、檢樣品孔，未使用的板條應(yīng)封好儲存于配有干燥劑的試劑盒中。2 向反應(yīng)孔中加入1滴（50 μl）上述血小板懸液，輕搖反應(yīng)板10 秒鐘，使反應(yīng)孔中的保護(hù)劑充分溶解。3 用平板離心機(jī)將反應(yīng)板以50g （650rpm）離心5分鐘，使血小板固定在微孔底部表面。4 倒出反應(yīng)孔中的液體，并用滴管滴加洗滌工作液清洗3次，洗滌過程中應(yīng)輕搖微孔板，然后再輕輕甩掉洗滌液。最后一次洗滌后將反應(yīng)板倒置于吸水紙上輕輕吸干殘余液體（切勿拍打）。5 立即

18、向每個反應(yīng)孔中加入2滴（100 μl）低離子溶液，并向相應(yīng)孔中加入1滴(50μl)待檢者樣本、陽性對照及陰性對照。低離子溶液將由紫色變?yōu)樘焖{(lán)或青綠色，如仍為紫色可能漏加樣本。,三血小板抗體檢測技術(shù)的簡述,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,16,（四）操作6 用封口膠將反應(yīng)孔封好，輕搖微孔板混勻后置于濕盒中，37℃水浴孵育30分鐘。7 按步驟5.4洗滌反應(yīng)板5次。8 立即加入1滴（50 μl）抗人IgG試劑及1滴（50

19、μl）指示細(xì)胞，輕輕震蕩混勻。9 將反應(yīng)板以200g（1300rpm）離心5分鐘。將待檢孔與對照孔的結(jié)果進(jìn)行比較，判讀結(jié)果。10 結(jié)果判定 10.1 陽性或弱陽性結(jié)果： 指示細(xì)胞在反應(yīng)孔底部平鋪形成細(xì)胞層為陽性；若指示細(xì)胞只結(jié)合到部分孔底，并且結(jié)合的區(qū)域比陰性對照大為弱陽性。表明待檢者血清或血漿中含有血小板抗體。 10.2陰性結(jié)果： 指示細(xì)胞在反應(yīng)孔底部中央形成細(xì)胞聚集。表明待檢者血清或血漿

20、 中不含血小板抗體。,三血小板抗體檢測技術(shù)的簡述,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,17,附 血小板抗體檢測簡易操作程序,一、準(zhǔn)備工作：1、試劑復(fù)溫；2、濕盒在水浴箱中平衡至37℃；3、配制洗滌工作液（蒸餾水；1：24）；4、制備血小板懸液（加生理鹽水500 μl）； 5、待檢樣本3000rpm離心5min。 二、操作步驟：6、 標(biāo)記反應(yīng)板條 ；7、加血小板懸液1滴（50 μl），輕搖反應(yīng)板10秒鐘；8、

21、平板離心機(jī)50g （650rpm）離心5分鐘；9、洗滌3次；10、加低離子溶液2滴（100 μl）；11、加待檢者樣本、陽性對照及陰性對照1滴(50μl)；12、封孔，輕搖反應(yīng)板10秒鐘，濕盒中37℃水浴孵育30分鐘；13、洗滌5次；14、加抗人IgG試劑1滴（50 μl）；15、加指示細(xì)胞1滴（50 μl），輕搖反應(yīng)板10秒鐘；16、平板離心機(jī)200g（1300rpm）離心5分鐘；17、判讀結(jié)果。,2024/3/2,

22、浙江省人民醫(yī)院 輸血科,18,四 我院開展血小板抗體檢測的簡況,1、2011年6月1日—12月31日共計檢測 次， 月平均檢測 人次，平均月增加收入 元；計劃 2012年有較大幅度的增長；社會效益明顯。2、血小板抗體檢測總陽性率。3、反復(fù)輸血的血液病患者的血小板抗體陽性率。4、有妊娠史婦女的血小板抗體陽性率。,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,19,,四 我院開展血小板抗體檢測的簡況,2024/3/2,浙

23、江省人民醫(yī)院 輸血科,20,四 我院開展血小板抗體檢測的簡況,,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,21,四 我院開展血小板抗體檢測的簡況,,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,22,五 如何應(yīng)對血小板抗體檢測陽性患者的體會 抗HLA抗體、抗血小板抗體檢查結(jié)果（日本）,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,23,五 如何應(yīng)對血小板抗體檢測陽性患者的體會,（一）輸注紅細(xì)胞懸液：1、我們研究認(rèn)為：血小板抗體檢測

24、陽性患者的非溶血性 發(fā)熱反應(yīng)明顯高于血小板抗體檢測陰性患者；血小板 抗體檢測陽性患者經(jīng)干預(yù)后非溶血性發(fā)熱反應(yīng)明顯下降。2、干預(yù)措施： 1）建議使用去白的紅細(xì)胞（血庫型或床旁型白細(xì)胞濾器） 2）建議使用洗滌的紅細(xì)胞 3）使用藥物 4）配血報告的“備注”欄注明：“請防范FNHTR等”。,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,24,五 如何應(yīng)對血小板抗體檢測陽性患者的體會,（

25、二） 輸注血漿： 1）輸血性急性肺損傷(transfusion related acute lung injury， TRALI)：文獻(xiàn)報道，輸血后發(fā)生的一系列嚴(yán)重呼吸窘迫病,其80%病例 輸入的血液中含有血小板抗體。 研究已經(jīng)證實：血小板抗體是引起TRALI的重要因素之一。 上海市血液中心楊穎教授認(rèn)為中國免疫性TRALI發(fā)病雖少，但 嚴(yán)重型較多。,2024/3/2,浙江省

26、人民醫(yī)院 輸血科,25,不同國家TRALI發(fā)生\死亡率,UK SHOT 德國 丹麥 法國 加拿大 1996-2003 1995 – 2002 1999 – 2002 1994 – 98 2000 – 03 例數(shù) 139 101 6

27、 34 21發(fā)生率% 7 3 7 0-15 0-5死亡率% 9 NR NR 20 9,,五 如何應(yīng)對血小板抗體檢測陽性患者的體會,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,26,

28、五 如何應(yīng)對血小板抗體檢測陽性患者的體會,2）僅輸注血漿患者的比例： 每個醫(yī)院的功能、理念、管理的差異性。 我院輸注血漿患者的比例： 僅輸注血漿患者的比例為3.7% 3）對于特殊患者，檢測患者、供者血液的血小板抗體是可行的、必要的，目的是進(jìn)一步保證輸血安全。,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,27,五 如何應(yīng)對血小板抗體檢測陽性患者的體會,（三）輸注血小板1.輸注血小板是提高

29、患者血小板計數(shù)，改善臨床出血癥狀最為快速、有效的方法和手段。2.輸注血小板并不是每次都能達(dá)到滿意效果，研究已經(jīng)證明反復(fù)多次隨機(jī)輸注血小板的患者，體內(nèi)極易產(chǎn)生血小板抗體，引起血小板輸注無效。HLA和HPA抗體是引起免疫性 血小板輸注無效的主要原因，其中HPA抗體可引起嚴(yán)重血小板同種免疫反應(yīng)。3 文獻(xiàn)報道，臨床血小板輸注無效發(fā)生率為30%～70%，其中免疫因素引起的血小板輸注無效約為20%。4.我國目前絕大多數(shù)醫(yī)療機(jī)構(gòu)采用隨機(jī)

30、輸注血小板，導(dǎo)致 血小板輸注無效頻繁發(fā)生。,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,28,五 如何應(yīng)對血小板抗體檢測陽性患者的體會,（三）輸注血小板5.血小板輸注無效的后果： 1）患者發(fā)生免疫反應(yīng)，加重病情。 2）患者病情得不到改善，病危甚至死亡。 3）浪費財力、物力、寶貴的血小板資源。 4）存在醫(yī)療糾紛隱患。 5）不利于采供血機(jī)構(gòu)和醫(yī)療機(jī)構(gòu)業(yè)務(wù)水平的提高。,2024/3/

31、2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,29,五 如何應(yīng)對血小板抗體檢測陽性患者的體會,（三）輸注血小板6 處理/干預(yù)血小板輸注無效較切實、合理的方法：1）臨床評估和處理血小板消耗增多的因素2）血小板抗體篩查(HPA、HLA)3）血小板抗體交叉配型,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,30,五 如何應(yīng)對血小板抗體檢測陽性患者的體會,（三）輸注血小板 7 我們研究結(jié)果： 1 ）我們研究結(jié)果顯示 ：

32、 血小板抗體陽性患者血小板交叉配型陽性率。 輸注血小板交叉配型試驗陰性的供者血小板的有效率。 輸注陽性的供者血小板的有效率。 血小板輸注采用隨機(jī)供者血小板有效率有效率。 2） 我們研究結(jié)果表明： 建議對于血小板抗體陽性患者，應(yīng)進(jìn)行血小板交叉配型試驗， 以選擇配型試驗陰性的供者血小板。

33、 為血小板輸注患者提供相容性血小板，可以減少血小板輸注 無效的發(fā)生，為社會節(jié)約寶貴的血小板資源。,2024/3/2,浙江省人民醫(yī)院 輸血科,31,六 血小板抗體檢測技術(shù)的應(yīng)用拓展,（一）自身抗體檢測 1 自身結(jié)合抗體檢測 2 自身游離抗體檢測（二）藥物依賴性抗體檢測（三）交叉配型（四）臨床疾病的實驗診斷和篩查：如輸血性急性肺損傷、習(xí)慣性 流產(chǎn)、