炎癥相關(guān)因子和microRNAs在胃MALT淋巴瘤中發(fā)病機制的探討.pdf

1、目的：
　　 MicroRNA是一類內(nèi)源性、不編碼蛋白的RNA，長約19-25個核苷酸長度，通過堿基配對原則結(jié)合到靶mRNA的3’UTR，進而降解靶mRNA或抑制靶mRNA的翻譯，從而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。microRNA發(fā)揮著抑癌基因或致癌基因的雙重效應(yīng)，涉及到腫瘤的新陳代謝、細胞增殖及凋亡、腫瘤侵襲等多個方面，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用，不同的腫瘤有著不同的microRNA表達譜。胃MALT淋巴瘤占MALT淋巴瘤的40％

2、-60％。研究表明，HP感染引起的胃黏膜淋巴細胞增生是MALT淋巴瘤病變基礎(chǔ)，部分胃MALT淋巴瘤抗HP治療可達到臨床完全緩解。目前對于microRNA在慢性炎癥向腫瘤轉(zhuǎn)化過程中的作用尚未完全明確。本研究在胃MALT淋巴瘤中對胃MALT淋巴瘤中microRNA表達變化及發(fā)病機制進行了初步研究，為MALT淋巴瘤的預(yù)防、和靶向治療提供了一定的理論依據(jù)和實驗數(shù)據(jù)。
　　 方法：
　　 (1)檢測microRNA在胃MALT淋巴

3、瘤腫瘤組織及瘤旁組織中表達譜的差異。
　　 ①收集長海醫(yī)院11例胃MALT淋巴瘤病例，根據(jù)HE形態(tài)、免疫標(biāo)記，結(jié)合WHO2008淋巴血液系統(tǒng)腫瘤診斷標(biāo)準(zhǔn)確定為胃MALT淋巴瘤。②采用微陣芯片技術(shù)檢測microRNA表達譜變化。分別提取腫瘤及瘤旁組織總RNA，然后進行microRNA芯片篩查及數(shù)據(jù)分析。③采用實時定量RT-PCR技術(shù)檢測14例胃MALT淋巴瘤腫瘤組織及瘤旁組織基因microRNA-188-5p、microRNA-1

4、34、microRNA-150、microRNA-100、microRNA-378、microRNA-155六條基因的表達差異。用SYBRGreenRealtimePCRMasterMix實時定量PCR擴增，U6作為內(nèi)參，3個復(fù)孔。以2-△Ct計算6條基因的腫瘤及瘤旁組織相對表達量。④根據(jù)患者臨床資料，利用SPSS13.0軟件包分析microRNA與患者預(yù)后的關(guān)系。
　　 (2)microRNA差異表達基因的靶基因蛋白檢測：

5、r>　　 ①通過(http://www.mirbase.org/andhttp://www.targetscan.org)查出miR-100及miR-378兩條基因的靶基因分別是TNFAIP8、SMARCA5和MMP14、MAPK1。②選取50例胃MALT淋巴瘤手術(shù)病人的腫瘤及瘤旁病理組織，采用LSAB法檢測MAPK1、TNFAIP8、SMARCA5和MMP14的表達。
　　 結(jié)果：
　　 (1)檢測microRNA在

6、胃MALT淋巴瘤腫瘤組織及瘤旁組織中表達譜的差異結(jié)果：
　　 ①microRNA基因芯片分析結(jié)果：表達量相差兩倍以上定為表達有差異，腫瘤組織中表達上調(diào)的基因有：microRNA-15a、microRNA-155、microRNA-16、microRNA-100、microRNA-142-3P、microRNA-150。表達下調(diào)的基因有：microRNA-375、microRNA-188-5p、microRNA-663、micro

7、RNA-134、microRNA-31、microRNA-1246、microRNA-200c、microRNA-12245p、microRNA-378、microRNA-200b。②RT-PCR結(jié)果分析結(jié)果：microRNA-188-5p腫瘤VS瘤旁：8.52±0.91VS9.05±1.03，P＞0.05；microRNA-100腫瘤VS瘤旁；6.83±1.18VS6.92±1.36，P＞0.05；microRNA-150腫瘤VS瘤旁

8、：4.784±1.37VS5.32±1.34，P＞0.05；microRNA-378腫瘤VS瘤旁：9.13±1.04VS7.38±1.44，P＜0.05；microRNA-134腫瘤VS瘤旁：12.92±1.05VS12.46±1.06，P＞0.05；miR-155腫瘤VS瘤旁：8.52±0.92VS9.05±1.03，P＞0.05。③利用SPSS軟件分析包，對患者臨床資料進行卡方檢驗，miRNA-378對于有無胃潰瘍P=0.01。mi

9、RNA-100對于HP陽性P=0.05，miRNA-155對于有無侵犯肌層P=0.03。
　　 (2)microRNA差異表達基因的靶基因蛋白檢測結(jié)果
　　 免疫組化檢測結(jié)果顯示腫瘤組織中，microRNA-378和microRNA-100的靶基因蛋白MAPK1、TNFAIP8、MMP14呈低表達，SMARCA5呈高表達。
　　 結(jié)論：
　　 (1)胃MALT淋巴瘤中腫瘤組織與瘤旁組織之間microRNA

10、表達譜具有差異性，其中16條基因具有顯著差異表達。
　　 (2)胃MALT淋巴瘤中，miR-378腫瘤組織表達較瘤旁組織表達高，具有統(tǒng)計學(xué)意義；miR-378表達和患者胃潰瘍的發(fā)生有關(guān)；HP感染可能是通過miR-100表達升高導(dǎo)致淋巴瘤的發(fā)生；miR-155對于患者腫瘤侵襲性有關(guān)。
　　 (3)miR-378基因?qū)е挛笣兛赡苁峭ㄟ^靶基因MMP14、MAPK1蛋白表達實現(xiàn)的，HP感染可能增加了miR-100基因的表達，進