急性經(jīng)口毒性實(shí)驗

1、急性經(jīng)口毒性實(shí)驗（Acute Oral Toxicity Test）,一、實(shí)驗?zāi)康模?（一）通過本次實(shí)驗掌握經(jīng)口灌胃技術(shù)，半數(shù)致死劑量的意義。（二）通過本次實(shí)驗學(xué)習(xí)半數(shù)致死劑量的計算及毒性判定。,二、測定方法：,本實(shí)驗以灌胃方式測定敵敵畏DDV（80g/100ml）的半數(shù)致死量（LD50）。,（一）實(shí)驗動物與分組：,首選健康成年小鼠(18g～25g)和大鼠(180g～220g) 。實(shí)驗前動物要在實(shí)驗環(huán)境中適應(yīng)3～5 d 時間，以了

2、解其正?；顒忧闆r和健康狀況，并淘汰不健康或體重不符合要求的動物 。本次實(shí)驗取體重18-25 g 的小鼠，實(shí)驗時，將小鼠稱體重、編號、按隨機(jī)分組原則，將實(shí)驗動物分成5組，每組8只。,（二）劑量選擇：,首先查閱與受試化學(xué)物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)相近似的化學(xué)物的LD50，以此值作為受試化學(xué)物的預(yù)期毒性中值，即中間劑量組，再上下各推1-2 個劑量組，進(jìn)行預(yù)實(shí)驗。各劑量組的間距可根據(jù)LD50 計算方法要求按等比級數(shù)或等差級數(shù)安排。本實(shí)驗用機(jī)率單位法

3、計算LD50，要求按等比級數(shù)排列，常用1：0.8，如敵敵畏的最高劑量為125 mg/kg，其次劑量組為125 mg/kg *0.8=100 mg/kg ，依次類推為80 、64 和51.2 mg/kg五個劑量組。,（三）受試化學(xué)物配制與稀釋,1. 溶劑： 水溶性受試化學(xué)物以蒸餾水為溶劑配制成溶液。脂溶性受試化學(xué)物以吐溫-80、二甲基亞砜、植物油等配制。,（三）受試化學(xué)物配制與稀釋,2. 受試物的稀釋等容量稀釋法，各個劑量組的動物

4、均給予相同單位體重體積的受試化學(xué)物，按照事先設(shè)計的劑量分別稀釋配制為幾種不同的濃度的受試物溶液。例如本次實(shí)驗五個劑量組:各劑量組動物給予相同單位體重體積受試物均為10ml/kg。,等容量稀釋法,D：設(shè)計的染毒劑量， mg/kg V：動物給藥量（相同單位體重體積）均為10ml/kgX：各組需配制的受試物溶液的濃度（mg/ml） 如：第一組染毒劑量D=51.2mg/kg，動物按V= 10ml/kg體重給藥，配制的受試物濃度

5、為X=51.2mg/10ml,,,，,依次類推：五個組所需配制的受試物濃度分別為第一組：51.2mg/10ml第二組： 64mg/10ml第三組： 80mg/10ml第四組： 100mg/10ml第五組： 125mg/10ml各劑量組小鼠灌胃容量計算:小鼠灌胃容量V ml=體重（g）×10ml/1000g各劑量組小鼠染毒劑量:小鼠染毒劑量= V ml ×各組的受試物濃度（mg/10ml),（四）灌胃

6、方法：,小鼠灌胃法：左手拇指和食指捏住小鼠頭部兩耳后皮膚，無名指或小指將尾部緊壓在手上，使小鼠腹部向上，盡量使其體位垂直，注意使動物的上消化道固定成一直線。右手持連著灌胃導(dǎo)針的注射器，將灌胃針由動物口腔側(cè)插入，避牙齒，沿咽后壁緩緩滑人食管。若遇阻力，可輕輕上下滑動探索，一旦感覺阻力消失，即深人至胃部，一般進(jìn)針深度小鼠2.5～4cm，隨后將受試物溶液注入。如遇動物掙扎，應(yīng)停止進(jìn)針或?qū)⑨槹纬觯f不能強(qiáng)行插入，以免穿破食管，甚至誤入氣管，導(dǎo)

7、致動物立即死亡。小鼠一次灌胃體積為10-20ml/kg,（五）中毒體征和死亡情況觀察,染毒后觀察和記錄中毒體征及出現(xiàn)的時間、死亡數(shù)量和時間及死亡前的特征。高劑量組動物的死亡常很快發(fā)生，染毒后應(yīng)即刻密切觀察。根據(jù)觀察情況分析中毒特點(diǎn)和毒作用靶器官。,觀察的項目包括：,（1）中樞神經(jīng)系統(tǒng)和神經(jīng)肌肉系統(tǒng)：體位異常、叫聲異常、不安、呆滯、痙攣、抽搐麻痹、運(yùn)動失調(diào)、對外反應(yīng)過敏或遲鈍； （2）植物神經(jīng)系統(tǒng)：瞳孔擴(kuò)大或縮小、流涎或流淚；（3

8、）呼吸系統(tǒng)：鼻孔流液、鼻翼煽動、血性分泌物、呼吸深緩、呼吸過速、仰頭呼吸、；（4）泌尿生殖系統(tǒng)：會陰部污穢、有分泌物、陰道或乳房腫脹；（5）皮膚和毛：皮膚充血、紫紺、被毛蓬松、污穢；（6）眼：眼球突出、結(jié)膜充血、角膜渾濁、血性分泌物；（7）消化系統(tǒng)：腹瀉、厭食。,三、LD50 計算：,可采用多種方法測定LD50，有機(jī)率單位法、霍恩氏法、寇氏法等，機(jī)率單位法能計算出任何反應(yīng)率水平的劑量，且實(shí)驗2-5組均可。機(jī)率單位法遵守的要求

9、：1. 劑量按等比級數(shù)排列，相鄰兩劑量組間的比值常用1：0.82. 各實(shí)驗組動物數(shù)相等,機(jī)率單位法計算LD50公式（用五個劑量組時）X3 ----為第三個組的劑量對數(shù)(X3=log 80， 80mg/kg)i-----為相鄰兩組劑量比值（以高劑量組為分子）的對數(shù)(i=log(125/100))y-----為死亡率相應(yīng)的機(jī)率單位（查附表） ---為五個劑量組的死亡率相應(yīng)的機(jī)率單位的均數(shù)。1、2、3、

10、4、5…為小劑量組到大劑量組的順序。5.0----為死亡率是50%時所相當(dāng)?shù)姆磻?yīng)率的機(jī)率單位,,,,,LD50的95%可信限=log-1(X + 1.96 SX ),,,四、結(jié)果評價：,根據(jù)實(shí)驗動物中毒體征、死亡時間、根據(jù)得出的LD50及受試物的種類，按相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)或技術(shù)規(guī)范中的急性經(jīng)口毒性分級標(biāo)準(zhǔn)（課本 215頁--農(nóng)藥的急性毒性分級）對受試物進(jìn)行毒性定級，判斷受試物的毒性大小。,五、注意事項：,1.灌胃時操作要避免損傷食道或誤入

11、氣管2.正確捉拿動物，防止被咬傷且避免動物損傷3.灌入量計算和操作要準(zhǔn)確，否則影響結(jié)果4.防止操作者中毒。注意通風(fēng)，不要把藥品撒到手、臉部皮膚及身體其他部位，操作過程中要小心。,六、實(shí)驗報告應(yīng)包括以下內(nèi)容：,1．實(shí)驗動物的種屬。2．實(shí)驗動物體重和隨機(jī)分組情況。3．受試物的名稱、性狀等情況。4．受試物的配制和溶劑。5．描述實(shí)驗觀察的中毒表現(xiàn)和死亡情況等。6．LD50的計算方法和結(jié)果。7．受試物的急性毒性分級、分級依據(jù)和結(jié)