agilent 1100色譜工作站操作培訓(xùn)課件

1、2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,Agilent 1100/化學(xué)工作站操作培訓(xùn),2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,Agilent 1100 日常開機(jī)步驟,打開計(jì)算機(jī)，進(jìn)入Windows系統(tǒng)，CAG Bootp Server 程序?qū)⒆詣?dòng)運(yùn)行；打開HPLC 1100各模塊電源，等儀器自檢通過，并且與計(jì)算機(jī)通訊成功（約1~2min）后，進(jìn)入Online 工作站系統(tǒng)初始化：（主要目的：排除系統(tǒng)中的氣泡）；

2、打開Purge 閥；加大泵流量并開啟泵，快速?zèng)_洗實(shí)驗(yàn)所用的各個(gè)通道，至無氣泡從廢液管排出，（eg. 設(shè)A通道100%，5mL/min，沖洗A通道至無氣泡排出；再分別依次沖洗所需其余通道B、C、D等）；降低流量及溶劑比例成實(shí)驗(yàn)初始條件，并單擊OK確認(rèn)執(zhí)行；（eg. 實(shí)驗(yàn)二的條件Flow: 1.0mL/min，A：20% (H2O), B: 80% (MeOH)；關(guān)閉Purge閥，完成系統(tǒng)初始化。系統(tǒng)平衡：（主要目的：平衡、穩(wěn)定色

3、譜柱、柱溫以及燈的能量）調(diào)出本次實(shí)驗(yàn)所需方法，保持泵繼續(xù)工作，以實(shí)驗(yàn)初始的流動(dòng)相沖洗、平衡柱子一段時(shí)間。（一般約30min ，可自己根據(jù)本人的儀器配置情況計(jì)算，要求至少以色譜柱幾何體積5~10倍體積的流動(dòng)相沖洗、平衡系統(tǒng)。）；在適當(dāng)時(shí)間，開啟柱溫箱和檢測器，使得柱溫穩(wěn)定，檢測器燈的能量穩(wěn)定。（一般燈需要20min 左右的穩(wěn)定時(shí)間。）點(diǎn)擊System On圖標(biāo)，可以同時(shí)打開柱溫箱和檢測器；打開View 菜單下的Online Sig

4、nal 窗口，單擊Change 鍵，選擇需要監(jiān)測的色譜信號(hào)并設(shè)定合適的X、Y軸范圍，觀測色譜基線；基線穩(wěn)定后可以進(jìn)樣分析（經(jīng)驗(yàn)上，基線波動(dòng)1~2m AU（常規(guī)分析）或~0.5mAU（痕量分析）就可算是基線穩(wěn)定。）填寫Sample InformationRun Method (或手動(dòng)打針進(jìn)樣并切換進(jìn)樣閥),2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,編輯一個(gè)完整的方法Edit Entire Method,,TCC,,ALS,

5、,All,,最窄峰的半峰寬,PeakWidth,,,Save,,BWref≥BWsam,BWref,,盡量靠近樣品的最大吸收,樣品沒有吸收/吸收比較弱處,WLref,,≥Slit,≈吸收光譜的半峰寬,BWsam,,大于溶劑的截止波長20nm以上,樣品的最大吸收,WLsam,DAD,WLsam,VWD,壓力限PressureLimits,時(shí)間表Timetable,后運(yùn)行Posttime,停止時(shí)間Stoptime,溶劑Solven

6、t,流量Flow,泵Pump,二、儀器控制/數(shù)據(jù)采集參數(shù) Instrument/Acquisition,描述性的文字,一、方法信息 Method information：,PeakWidth,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,手動(dòng)積分（Manual events）,積分事件（Integration events）,自動(dòng)積分（Auto Integrate）,3、積分優(yōu)化：,,Full,Range,2、譜圖優(yōu)化：,1

7、、調(diào)用數(shù)據(jù)文件,三、數(shù)據(jù)分析（Data Analysis）,……………………,平均/取代,選級(jí)別Level,Recalibrate,第三針,平均/取代,選級(jí)別Level,Recalibrate,第二針,,輸入含量,Add Level,第一針,Level 3,平均/取代,選級(jí)別Level,Recalibrate,第三針,平均/取代,選級(jí)別Level,Recalibrate,第二針,,輸入含量,Add Level,第一針,Level 2,平

8、均/取代,選級(jí)別Level,Recalibrate,第三針,平均/取代,選級(jí)別Level,Recalibrate,第二針,指定參考峰、內(nèi)標(biāo)峰,輸入組分名稱、含量,New Calibration Table,第一針,Level 1,4、建立校正表 Calibration,,,,,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,保存/另存方法Save/Save As,GLP Data、Save Method With Data,規(guī)定執(zhí)行數(shù)

9、據(jù)采集、分析或同時(shí)進(jìn)行,四、運(yùn)行時(shí)間對(duì)照表（Run Time Checklist）,色譜圖選項(xiàng),輸出目的地,報(bào)告格式（Short、Detail、Performance、Performance +Noise）,定量方式（ESTD、ISTD…….）,6、設(shè)定報(bào)告格式,權(quán)重Weight,原點(diǎn)Origin,類型Type,校正曲線 Calibration Curve,樣品單位 Amount units,5、校正設(shè)置（Calibration Set

10、ting）,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,A1,A2,A3,假定：,C1,C2,C3,1,2,3,,,假定：,∴,,,∴,已知：,∴,∴,面積百分比,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,一、標(biāo)樣,A標(biāo)1,A標(biāo)2,A標(biāo)3,C標(biāo)1,C標(biāo)2,C標(biāo)3,1,2,3,RF1,RF3,RF2,二、樣品,A1,A2,A3,1′,2′,3′,∵,∴,歸一化法,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,一、標(biāo)樣,A

11、標(biāo),C標(biāo),1,RF,二、樣品,A樣,1′,∵,∴,外標(biāo)法,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,一、標(biāo)樣,,,A標(biāo),A標(biāo)內(nèi),C標(biāo),C標(biāo)內(nèi),1,ISTD,RF標(biāo),RF標(biāo)內(nèi),二、樣品,A樣,A樣內(nèi),1′,∴,ISTD,假定：,C樣,C樣內(nèi),RF樣,RF樣內(nèi),可求：,RF樣,則：,√,√,√,？,則：,內(nèi)標(biāo)法,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,,,,,,,,,,,Pump,Column,手動(dòng)閥,2024/3/18,

12、安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,流路圖,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,,,PUMP,,,,,ALS,,ColumnTCC,,,Det,,,,,,,甲醇,水,甲醇,水,,40%,60%,5倍以上的總延遲體積，平衡柱子，置換流動(dòng)相,,,,,延遲體積,死體積,1100 結(jié)構(gòu)框圖,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,,甲醇,水,,40%,60%,,,,10Stoptime,35Postime,,,

13、=25,=10,Posttime,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,A,B,C,D,AIV,緩沖鹽+有機(jī)相，鹽析出會(huì)沉淀,緩沖鹽+有機(jī)相，析出的鹽被A路的水相稀釋，避免沉淀的發(fā)生,四元比例閥,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,洗柱子的方法,流動(dòng)相：甲醇（80%） +水（20%）樣品：有機(jī)物直接用100%的甲醇洗柱子流動(dòng)相：緩沖鹽+甲醇樣品：有機(jī)物洗鹽： 水（100%）水（90%）+甲醇（

14、10%）洗有機(jī)物：甲醇（100%）,×,√,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,手動(dòng)進(jìn)樣器,前視圖,后視圖,,,,樣品定量管,,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,自動(dòng)進(jìn)樣器,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,進(jìn)樣口,檢測器,色譜圖,,,

15、,,,,,,,,,,,,,,,,,,色譜柱,溶劑,泵,混合器,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,HPLC 結(jié)構(gòu)框圖,HPLC 結(jié)構(gòu)框圖,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保

16、生,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,初始,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,帶寬,最終,帶寬,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,A,A = 渦流擴(kuò)散——多徑擴(kuò)散,仔細(xì)填充柱子,使用均一的載體,,,,,,,,線 速 度,H,E,T,P,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,

17、,,,渦流擴(kuò)散相,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,,擴(kuò)散,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,滯流的流動(dòng)相,,,流動(dòng)相,,固定相,,,,,C,.,u,,C = 傳質(zhì)阻力,,在低流速下可以降低傳質(zhì)阻力,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,使用小顆粒載體可以降低傳質(zhì)阻力,,,,,,,,,H,E,T,P,線速度,傳質(zhì)阻力,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)

18、中心 于保生,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,往復(fù)活塞泵(單向閥),,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,Gold Seal,Sapphire,Insert,Ruby Ball,Spring,Insert,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,單向閥及往復(fù)活塞泵,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)

19、中心 于保生,,,,減小流量脈沖－并聯(lián)柱塞泵,單向閥,,P,,,,,A,B,A,B,,,,,,,,,,,,,Single,Piston,Delivery,柱塞A前進(jìn),柱塞B后退,,,Combined,Delivery,相消干擾,通常也需要阻尼器,增加了單向閥的使用數(shù)量,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,P,,,,,,,,,,,,,,,,串聯(lián)柱塞泵,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,,

20、單向閥,,,P,需要阻尼器,,,,,,,,,,,,,壓縮因子補(bǔ)償,,,脈沖阻尼器,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,并聯(lián)柱塞泵,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,紫外－可見檢測器,根據(jù)Beer定律，通過檢測池透射光的強(qiáng)度與溶質(zhì)濃度成正比。,,I0 = 入射光強(qiáng)度,I = 透射光強(qiáng)度,A = 吸光度,a = 摩爾吸光系數(shù),b = 檢測池長度,c = 溶質(zhì)濃度,,I,I,C,b,o,Detec

21、tor Cell,,,,,,Log = A = abc,Beer定律,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,,Instrumentation - Absorbance,,,Variable Wavelength (UV/Visible),Light,Monochromator,flow,,,Source,Cell,,,,,,,,,,Detector,Element,Slits,Mechanical,Gratin

22、g,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,Detectors,VWD 光路圖,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,,Instrumentation - Absorbance,,Photodiode Array (UV/Visible),,,,,,,,,,Light,Flow,Source,Cell,Photodiode,Lenses,Slits,,,,,,,Array,Holographic,Grating,,,,,,,,

23、,Detectors,DAD 光路圖,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,,單元泵工作原理,Authoring Division Name File NameSecurity Notice (if required),Damper,Seal,Piston,Ball Screw Drive,Motor with Encoder,Gear,,,Outlet Ball Valve,Active Inlet Valve,

24、,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,Purge valve,單元泵工作原理,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,四元泵工作原理,Authoring Division Name File NameSecurity Notice (if required),,,,,,,,,,,Vacuum Chamber,MCGV,AIV,OBV,Damper,Purge Valve,W

25、aste,to injection device,from solventbottles,MCGV 比例閥AIV 主動(dòng)閥OBV 單向閥,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,

26、,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,

27、,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,四元泵工作原理,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,二元泵工作原理,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,Damper,Purge valve,Mixer,A,B,,,,,,,,,,,,,,,,Inlet valve,Outlet valve,Waste,,,,,,,,,,,,,,,,Inlet valve,Outlet valve,,,,,二元泵工作原理,2

28、024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,pure,impure,,7.6,7.8,8.0,8.2,8.4,Time (min),,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,200,400,Wavelength (nm),Purity Match 764,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,200,400,Wavelengt

29、h (nm),Purity Match 999,Absorbance,Absorbance,純度因子,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,六通閥之扎針,,,,,,,,,,泵,色譜柱,定量環(huán),廢液,排空,,,,,,,,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,六通閥之裝樣,,,,,,,,,,泵,色譜柱,定量環(huán),廢液,排空,,,,,,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,,,,,,,,,,泵,色譜柱

30、,定量環(huán),廢液,排空,,,,,,,,六通閥之進(jìn)樣,六通閥之進(jìn)樣,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,,,,,,,,,,泵,色譜柱,定量環(huán),廢液,排空,,,,,,,六通閥之小刻度進(jìn)樣一,六通閥之小刻度進(jìn)樣一,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,,,,,,,,,泵,色譜柱,定量環(huán),廢液,排空,,,,,,,六通閥之小刻度進(jìn)樣二,,,,,六通閥之小刻度進(jìn)樣二,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保

31、生,積分事件表：面積加和 開啟/關(guān)閉,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,積分事件表： 基線劃至所有峰谷開啟/關(guān)閉,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,積分事件表：基線后置，維持開啟/關(guān)閉,Baseline Back,,,基線后置,基線維持,,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心 于保生,積分事件表：積分器與負(fù)峰檢測開啟/關(guān)閉,積分器 關(guān)閉/開啟,負(fù)峰檢測開啟/關(guān)閉,2024/3/18,安捷倫廣州培訓(xùn)中心