esRAGE基因修飾OECs移植對(duì)糖尿病缺血性足部潰瘍的治療研究.pdf

1、研究目的:
　　1、觀察正?？瞻讓?duì)照組、單純糖尿病組、糖尿病缺血性足部潰瘍組、糖尿病缺血性足部潰瘍注射未轉(zhuǎn)染OECs組、糖尿病缺血性足部潰瘍注射轉(zhuǎn)染后OECs組、糖尿病缺血性足部潰瘍注射DMEM培養(yǎng)液組6組大鼠肌肉組織RAGE、NF-kB、VEGF和TGF-β1等mRNA和蛋白的表達(dá)水平。
　　2、探討esRAGE基因轉(zhuǎn)染OECs進(jìn)行細(xì)胞移植的同時(shí)提高局部esRAGE水平對(duì)糖尿病缺血性足部潰瘍的治療作用。
　　方法:<

2、br>　　SD雄性大鼠60只,體重260-300g,隨機(jī)分為6組:正?？瞻讓?duì)照組(N組)10只,單純糖尿病組(DM組)10只;糖尿病缺血性足部潰瘍組(DFU組)10只;糖尿病缺血性足部潰瘍注射未轉(zhuǎn)染OECs組(DFU+OECs組)10只;糖尿病缺血性足部潰瘍注射轉(zhuǎn)染后OECs組(DFU+esRAGE+OECs組)10只;糖尿病缺血性足部潰瘍注射DMEM培養(yǎng)液組(DFU+DMEM組)10只。實(shí)驗(yàn)組大鼠給予1％鏈脲佐菌素(50毫克/公斤)腹

3、腔注射,對(duì)照組予以等劑量檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液腹腔注射。空腹血糖(FBG)≥16.7 mmol/L視為糖尿病造模成功。一周后,每只大鼠以10%水合氯醛按3.0 m/k g腹腔注射麻醉,沿左側(cè)腹股溝中點(diǎn)至膝內(nèi)側(cè)作約1.5cm長(zhǎng)的切口,分離出股動(dòng)脈及其分支并結(jié)扎,同時(shí)結(jié)扎腘動(dòng)脈。DFU+OECs組、DFU+esRAGE+OECs組分別進(jìn)行細(xì)胞移植,DFU+DMEM組用相同方法注射DMEM培養(yǎng)液作對(duì)照。沿股動(dòng)脈至腘動(dòng)脈走向于內(nèi)收肌至腓腸肌選取

4、6個(gè)點(diǎn),每隔2mm用麻醉針頭肌肉注射移植液體50uL,共0.3mL(細(xì)胞總數(shù)5×105個(gè))。DFU+OECs組注射未轉(zhuǎn)染OECs,DFU+esRAGE+OECs組注射轉(zhuǎn)染后OECs,DFU+DMEM組注射DMEM培養(yǎng)液。細(xì)胞移植完畢后用剪刀在左側(cè)下肢足部背側(cè)造成穿透全層皮膚的傷口,剪下5mm×5mm面積的皮膚。移植后大鼠在同等條件下飼養(yǎng)4周,同時(shí)觀察傷口愈合情況。于第4周末頸椎脫臼處死大鼠,取細(xì)胞移植處肌肉組織,采用HE染色檢測(cè)毛細(xì)血管

5、分布密度及內(nèi)皮細(xì)胞增生情況。通過使用TUNEL方法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的表達(dá)。采用熒光定量PCR和免疫組化檢測(cè)組織RAGE、NF-κB、VEGF和TGF-β1等mRNA和蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　與DFU組、DFU+DMEM組大鼠肌肉組織中 NF-κB表達(dá)強(qiáng)度比較, DFU+OECs組、DFU+OECs+esRAGE組大鼠肌肉組織NF-κB表達(dá)減少,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與DFU+OECs組相比,DFU+OECs

6、+esRAGE組大鼠NF-κB表達(dá)量減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　與 DFU組、DFU+DMEM組大鼠肌肉組織中 RAGE表達(dá)強(qiáng)度比較, DFU+OECs組、DFU+OECs+esRAGE組大鼠肌肉組織RAGE表達(dá)減少,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與DFU+OECs組相比, DFU+OECs+esRAGE組大鼠RAGE表達(dá)量減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　與DFU組、DFU+DMEM組大

7、鼠肌肉組織中TGF-β1表達(dá)強(qiáng)度比較, DFU+OECs組、DFU+OECs+esRAGE組大鼠肌肉組織TGF-β1表達(dá)增加,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與DFU+OECs組相比,DFU+OECs+esRAGE組大鼠TGF-β1表達(dá)量增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　與DFU組、DFU+DMEM組、DFU+OECs組三組相比,DFU+OECs+esRAGE組大鼠VEGF蛋白表達(dá)量稍有增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<

8、0.01)。
　　與DFU組、DFU+DMEM組大鼠肌肉組織中細(xì)胞凋亡量比較,DFU+OECs組、DFU+OECs+esRAGE組大鼠肌肉組織凋亡減少,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);DFU組、DFU+DMEM組大鼠肌肉組織中細(xì)胞凋亡量較正常對(duì)照組及DM組大鼠增多(P<0.01);與DFU+OECs組相比,DFU+OECs+esRAGE組大鼠細(xì)胞凋亡量減少且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);
　　與DFU組、DFU+DM

9、EM組大鼠肌肉組織中RAGEmRNA表達(dá)強(qiáng)度比較, DFU+OECs組、DFU+OECs+esRAGE組大鼠肌肉組織RAGEmRNA表達(dá)增強(qiáng),且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與DFU+OECs組相比,DFU+OECs+esRAGE組大鼠RAGEmRNA表達(dá)量降低,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);
　　結(jié)論:
　　1、esRAGE基因修飾的OECs移植大鼠肌肉組織RAGE、NF-kB蛋白的表達(dá)和RAGEmRNA含量水平