菌種代號(hào)的意義

1、菌種的傳代與保存菌種的傳代與保存菌種代號(hào)的意義菌種代號(hào)的意義?國(guó)內(nèi)藥品微生物檢驗(yàn)所用的菌種代號(hào)是國(guó)內(nèi)藥品微生物檢驗(yàn)所用的菌種代號(hào)是?CMCC（F）或）或CMCC（B）?CMCC——中國(guó)醫(yī)學(xué)菌種保藏中心中國(guó)醫(yī)學(xué)菌種保藏中心?B——代表細(xì)菌，代表細(xì)菌，F(xiàn)——代表真菌。代表真菌。?大腸桿菌大腸桿菌[CMCC(B)44102]?乙型副傷寒沙門(mén)桿菌乙型副傷寒沙門(mén)桿菌[CMCC(B)50094]?銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌[CMCC(B)10104]

2、?金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]?生孢梭菌生孢梭菌[CMCC(B)64941]?白色念珠菌白色念珠菌[CMCC(F)98001]常用菌種保藏方法常用菌種保藏方法(一)菌種保藏的原理菌種保藏的原理?根據(jù)微生物的菌種生理、生化特性，在人工創(chuàng)造的條件下盡量降低微生物細(xì)胞的代根據(jù)微生物的菌種生理、生化特性，在人工創(chuàng)造的條件下盡量降低微生物細(xì)胞的代謝強(qiáng)度，使細(xì)胞基本處于休眠狀態(tài)，生長(zhǎng)繁殖受到抑制但又不至于死亡，以減低菌謝

3、強(qiáng)度，使細(xì)胞基本處于休眠狀態(tài)，生長(zhǎng)繁殖受到抑制但又不至于死亡，以減低菌種的變異率。低溫、干燥、缺氧、缺乏營(yíng)養(yǎng)等環(huán)境條件都有抑制微生物的代謝作用。種的變異率。低溫、干燥、缺氧、缺乏營(yíng)養(yǎng)等環(huán)境條件都有抑制微生物的代謝作用。?低溫、干燥、真空是用于菌種保藏的重要手段。低溫、干燥、真空是用于菌種保藏的重要手段。選擇保藏方法時(shí)，首先應(yīng)考慮方法能否長(zhǎng)期地選擇保藏方法時(shí)，首先應(yīng)考慮方法能否長(zhǎng)期地保持菌種原有的特性，同時(shí)也應(yīng)兼顧到方法的經(jīng)濟(jì)保持菌種原有

4、的特性，同時(shí)也應(yīng)兼顧到方法的經(jīng)濟(jì)和簡(jiǎn)便。在實(shí)際工作中，往往多種條件同時(shí)使用和簡(jiǎn)便。在實(shí)際工作中，往往多種條件同時(shí)使用以提高保藏效果。以提高保藏效果。（二）菌種保藏步驟（二）菌種保藏步驟①挑選特征典型的純菌菌落；挑選特征典型的純菌菌落；②確定保藏的合適菌體形態(tài)；確定保藏的合適菌體形態(tài)；③選擇最適宜的保藏方法；選擇最適宜的保藏方法；④定期對(duì)保藏菌種進(jìn)行檢查，觀察是否發(fā)生變化，若有變化，須改變保藏方法。保藏期滿定期對(duì)保藏菌種進(jìn)行檢查，觀察是否

5、發(fā)生變化，若有變化，須改變保藏方法。保藏期滿應(yīng)及時(shí)進(jìn)行移種。應(yīng)及時(shí)進(jìn)行移種。1.瓊脂斜面低溫保存法瓊脂斜面低溫保存法?（1）方法：將經(jīng)常使用的菌種的典型菌落接種在斜面（某些特殊菌種可用液體培）方法：將經(jīng)常使用的菌種的典型菌落接種在斜面（某些特殊菌種可用液體培養(yǎng)基）上，按規(guī)定的溫度和時(shí)間培養(yǎng)，待充分生長(zhǎng)后，把培養(yǎng)好的新鮮菌種用牛皮養(yǎng)基）上，按規(guī)定的溫度和時(shí)間培養(yǎng)，待充分生長(zhǎng)后，把培養(yǎng)好的新鮮菌種用牛皮紙保好，為減緩培養(yǎng)基的水分蒸發(fā)，延長(zhǎng)保

6、藏時(shí)間，可將菌種保藏管的棉花塞換成紙保好，為減緩培養(yǎng)基的水分蒸發(fā)，延長(zhǎng)保藏時(shí)間，可將菌種保藏管的棉花塞換成橡膠塞。放在橡膠塞。放在4℃左右的冰箱中保藏。每隔左右的冰箱中保藏。每隔2~3個(gè)月移種一次，繼續(xù)進(jìn)行保藏。若個(gè)月移種一次，繼續(xù)進(jìn)行保藏。若用半固體高層培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)，一般可保藏半年用半固體高層培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)，一般可保藏半年~一年。有的甚至更長(zhǎng)時(shí)間。一年。有的甚至更長(zhǎng)時(shí)間。?（2）適用范圍：細(xì)菌、酵母菌、霉菌保藏。）適用范圍：細(xì)菌、酵

7、母菌、霉菌保藏。各類(lèi)菌種保藏條件及時(shí)間各類(lèi)菌種保藏條件及時(shí)間菌種培養(yǎng)基保存溫度保存溫度傳種時(shí)間細(xì)菌一般多用于營(yíng)養(yǎng)瓊脂一般多用于營(yíng)養(yǎng)瓊脂鮮斜面上培鮮斜面上培養(yǎng)，待長(zhǎng)出新培養(yǎng)物后，再移種一次到新斜面上養(yǎng)，待長(zhǎng)出新培養(yǎng)物后，再移種一次到新斜面上即可使用。即可使用。④將沾有少量液體石蠟的接種針浸于將沾有少量液體石蠟的接種針浸于95%酒精中片刻，再燒灼滅菌，以免直接在酒精燈下酒精中片刻，再燒灼滅菌，以免直接在酒精燈下燒灼時(shí)，液體石蠟四濺，引起污染

8、。燒灼時(shí)，液體石蠟四濺，引起污染。⑤液體石蠟在菌種管中高出培養(yǎng)基的高度要嚴(yán)格控制，如太多，會(huì)影響菌種交換氣體，使液體石蠟在菌種管中高出培養(yǎng)基的高度要嚴(yán)格控制，如太多，會(huì)影響菌種交換氣體，使保藏效果不好；如太少，斜面容易干燥，將縮短保藏期。一般以高出斜面保藏效果不好；如太少，斜面容易干燥，將縮短保藏期。一般以高出斜面1㎝為宜。為宜。⑥制備無(wú)菌液體石蠟時(shí)，每管裝量不能太多，否則分裝到菌種培養(yǎng)基中易造成污染。制備無(wú)菌液體石蠟時(shí)，每管裝量不能太

9、多，否則分裝到菌種培養(yǎng)基中易造成污染。四、試驗(yàn)用菌種的培養(yǎng)傳代方法四、試驗(yàn)用菌種的培養(yǎng)傳代方法?程序：程序：凍干菌復(fù)蘇凍干菌復(fù)蘇————接種（斜面）接種（斜面）（菌種傳代）（菌種傳代）（營(yíng)養(yǎng)肉湯）（營(yíng)養(yǎng)肉湯）制備菌懸液制備菌懸液對(duì)照菌液對(duì)照菌液?檢定用標(biāo)準(zhǔn)菌種，由中國(guó)藥品生物檢定所提供，為冷凍干燥菌種。檢定用標(biāo)準(zhǔn)菌種，由中國(guó)藥品生物檢定所提供，為冷凍干燥菌種。?菌種的復(fù)蘇與保存在專(zhuān)用無(wú)菌室或超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。菌種的復(fù)蘇與保存在專(zhuān)用無(wú)菌室

10、或超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。1菌種的復(fù)蘇菌種的復(fù)蘇?把凍干菌種管、滅菌把凍干菌種管、滅菌1ml滴管、雙碟、鑷子、營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面數(shù)支，移滴管、雙碟、鑷子、營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面數(shù)支，移入接種室或凈化工作臺(tái)。入接種室或凈化工作臺(tái)。?先用砂輪將凍干菌種安瓶頸部挫出刻痕先用砂輪將凍干菌種安瓶頸部挫出刻痕再將凍干菌種管外壁用碘酒擦洗消毒、稍干，用再將凍干菌種管外壁用碘酒擦洗消毒、稍干，用75%乙醇棉擦凈，放在滅菌雙碟內(nèi)，待干。點(diǎn)燃酒精

11、燈，將菌種管的封口一端在火焰上，乙醇棉擦凈，放在滅菌雙碟內(nèi)，待干。點(diǎn)燃酒精燈，將菌種管的封口一端在火焰上，燒灼紅熱，用滅菌滴管吸取營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，滴在灼熱的菌種管封口一端，使驟冷而炸裂。燒灼紅熱，用滅菌滴管吸取營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，滴在灼熱的菌種管封口一端，使驟冷而炸裂。?取滅菌鑷子，在火焰旁，將炸裂的管口打開(kāi)，放入滅菌雙碟內(nèi)，另取取滅菌鑷子，在火焰旁，將炸裂的管口打開(kāi)，放入滅菌雙碟內(nèi)，另取1支滅菌滴管，在支滅菌滴管，在火焰旁吸取營(yíng)養(yǎng)肉湯少許

12、，加至菌種管底部，將凍干菌攪動(dòng)促使溶解，隨即吸出管內(nèi)菌液，火焰旁吸取營(yíng)養(yǎng)肉湯少許，加至菌種管底部，將凍干菌攪動(dòng)促使溶解，隨即吸出管內(nèi)菌液，分別接種至營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面及普通肉湯內(nèi)，并將滴管及菌種管投入消毒液內(nèi)，將已接種的營(yíng)分別接種至營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面及普通肉湯內(nèi)，并將滴管及菌種管投入消毒液內(nèi)，將已接種的營(yíng)養(yǎng)肉湯及營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面置養(yǎng)肉湯及營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面置35~37℃培養(yǎng)培養(yǎng)22~24h。取出培養(yǎng)物，仔細(xì)觀察菌苔形態(tài)、有無(wú)雜菌、涂片、革蘭氏染色鏡檢，呈典型

13、菌落后，取出培養(yǎng)物，仔細(xì)觀察菌苔形態(tài)、有無(wú)雜菌、涂片、革蘭氏染色鏡檢，呈典型菌落后，轉(zhuǎn)種轉(zhuǎn)種3代即可應(yīng)用。如發(fā)現(xiàn)菌型不典型，可進(jìn)行平板分離單菌落。代即可應(yīng)用。如發(fā)現(xiàn)菌型不典型，可進(jìn)行平板分離單菌落。2菌種的傳代與保存菌種的傳代與保存方法（方法（1）：）：菌斜面菌斜面菌斜面（保存）菌斜面（保存）?培養(yǎng)基應(yīng)新鮮制備，如斜面已無(wú)冷凝水者，不宜再使用。標(biāo)簽上著名菌名及接種日培養(yǎng)基應(yīng)新鮮制備，如斜面已無(wú)冷凝水者，不宜再使用。標(biāo)簽上著名菌名及接種日

14、期。至冰箱取出的菌種斜面，應(yīng)在室溫放置約期。至冰箱取出的菌種斜面，應(yīng)在室溫放置約30分鐘，待溫度平衡后再移入接種室或超凈分鐘，待溫度平衡后再移入接種室或超凈工作臺(tái)。工作臺(tái)。?點(diǎn)燃酒精燈，用左手握住菌種斜面，將管口靠進(jìn)火焰旁，右手拿接種棒后端，將接種點(diǎn)燃酒精燈，用左手握住菌種斜面，將管口靠進(jìn)火焰旁，右手拿接種棒后端，將接種環(huán)燒紅環(huán)燒紅30秒，隨后將全部接種棒金屬部分在火焰上燒灼，往返通過(guò)秒，隨后將全部接種棒金屬部分在火焰上燒灼，往返通過(guò)3