醫(yī)學(xué)博士開題報(bào)告輸尿管部分梗阻的動(dòng)物模型的制作

1、,,,xx大學(xué)第一臨床學(xué)院xxxx級(jí)外科學(xué)(泌尿)研究生開題報(bào)告,歡迎蒞臨指導(dǎo)！,?輸尿管部分梗阻是一種常見的臨床現(xiàn)象，可由多種因素引起，梗阻如不能及時(shí)解除，將導(dǎo)致腎積水，腎積水使腎盂內(nèi)壓力逐漸升高，壓迫腎小管，腎小球及其附近的血管，造成腎組織缺血缺氧，腎實(shí)質(zhì)逐漸萎縮變薄，腎容積增大，最后全腎成為一個(gè)無功能的巨大水囊。 ?臨床上由輸尿管梗阻引起的腎積水較常見，輸尿管完全梗阻與不全梗阻引起腎的病理

2、生理學(xué)變化有很大的不同[1,2]，輸尿管梗阻大多數(shù)是部分梗阻。,,,,立題依據(jù),?目前對(duì)于與梗阻性腎積水發(fā)生發(fā)展過程有關(guān)的分子改變事件進(jìn)行了許多的研究,結(jié)果表明梗阻性腎病發(fā)生發(fā)展過程存在著復(fù)雜的分子調(diào)控機(jī)制，但在腎積水病理演變過程中,也涉及了一系列梗阻后腎形態(tài)學(xué)如腎血管方面的變化，梗阻前后腎血管形態(tài)上有著怎樣的變化？以及梗阻解除后隨著積水程度的減輕，腎血管形態(tài)是否相應(yīng)的恢復(fù)，如何解釋這些現(xiàn)象？形態(tài)學(xué)與分子機(jī)制之間有著怎樣的聯(lián)系？,,研究

3、現(xiàn)狀,,?輸尿管部分梗阻的動(dòng)物模型的制作 早在世紀(jì)中期就有學(xué)者進(jìn)行研究，迄今為止已有多種輸尿管部分梗阻模型報(bào)道，但各具優(yōu)缺點(diǎn)，都有其相應(yīng)的適用范圍[3-10]：?輸尿管套管法 ?輸尿管腰大肌隧道包埋法?輸尿管不全結(jié)扎法?銀夾半環(huán)夾法 ?輸尿管內(nèi)支架置入法,,,,?血管鑄型填充劑 隨著化工業(yè)的快速發(fā)展，不斷出現(xiàn)新的鑄型材料，血管鑄型的方法也在不斷的改進(jìn)，常用的填充材料：,,,,? X 線填充劑,明膠氧

4、化鉛：?20 世紀(jì)30 年代, 法國解剖學(xué)家Salmon 曾通過整尸灌注氧化鉛進(jìn)行血管造影, 系統(tǒng)地研究了全身皮膚、肌肉的血管分布狀況[21,22]。? 1986 年, Taylor 對(duì)其灌注液的配方進(jìn)行了改進(jìn), 自此, 明膠- 氧化鉛灌注技術(shù)成了皮瓣血管解剖學(xué)研究的重要手段[23]。?唐茂林, 樓新法等進(jìn)一步改良, 不僅造影效果比以前大有提高, 而且氧化鉛的用量大幅度減少[24,25]。并首次引入數(shù)字化圖像處理技術(shù)對(duì)全身動(dòng)脈進(jìn)行

5、了3D 可視化研究及皮動(dòng)脈的定位定量研究[26, 27],,氧化鉛( lead oxide, LO)顆粒小、水溶性、分散性好,一直被認(rèn)為是較好的X 線填充劑。但其目前所用載體成分明膠是動(dòng)物膠原蛋白, 分子量大, 交鏈呈三維網(wǎng)狀, 氧化鉛在其內(nèi)的分布不是很均勻。在三維重建圖像中, 易出現(xiàn)血管造影空泡、毛刺等。,羧甲基纖維素/氧化鉛水凝膠 (hydrogel of carboxymethylcellulose with lead oxide

6、, HCMCL)：,羧甲基纖維素( carboxymethylcellulose, CMC) 具有優(yōu)異的分散性, 在工業(yè)和醫(yī)藥化工行業(yè)中廣泛應(yīng)用[28,29]。周小兵以CMC作為氧化鉛(lead oxide , LO) 的載體,配制成CMC-LO 造影填充劑，從均勻性和CT 值角度系統(tǒng)地研究分析了LO/CMC 最佳比例以及水凝膠物的體積變形特點(diǎn)和穩(wěn)定性。在獲取最佳配比的基礎(chǔ)上, 選用SD 大鼠進(jìn)行全身血管灌注試驗(yàn), 經(jīng)CT 掃描、三維重

7、建所得圖像清晰, 取得了滿意的效果。,目前國內(nèi)外對(duì)于正常人、動(dòng)物腎動(dòng)脈及分支、腎小球的形態(tài)分布[14,15,30,31]作了研究，對(duì)于動(dòng)物模型腎動(dòng)脈及分支、腎小球的研究報(bào)道少見，尤其是腎積水模型方面尚未見報(bào)道，腎血管三維重建的研究亦未見報(bào)道。 梗阻性腎病的特征性病理學(xué)變化主要表現(xiàn)為腎小管萎縮和間質(zhì)纖維化, 而腎小管上皮細(xì)胞凋亡是腎小管萎縮和腎實(shí)質(zhì)喪失的重要原因[32,33]。 在腎積水的過程中，腎動(dòng)脈及其分支、

8、毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞是否有凋亡？凋亡的程度如何？凋亡與血管形態(tài)的改變有著怎樣的關(guān)聯(lián)？血管形態(tài)的改變?cè)谀I積水的病理演變過程中起著怎樣的作用？未見相關(guān)報(bào)道。,因此，基于上述研究現(xiàn)狀，得出研究題目： 輸尿管部分梗阻血管重塑的形態(tài)學(xué)改變及機(jī)制,,研究目的,1. 輸尿管部分梗阻動(dòng)物模型梗阻前、后、以及解除梗阻后的腎血管形態(tài)變化規(guī)律；2. 對(duì)輸尿管部分梗阻動(dòng)物模型的血管灌注技術(shù)進(jìn)行探索，以實(shí)現(xiàn)模型三維可視化；3. 輸尿管部分梗阻動(dòng)物模型血管

9、形態(tài)變化與腎血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的關(guān)系，為臨床腎積水的防治提供理論依據(jù)。,,研究方法、可行性分析,?鑄型：?腎小球鑄型：腎動(dòng)脈插管，采用聚甲基丙烯酸填充劑灌注；?腎盂腎盞鑄型：輸尿管插管，采用過氯乙烯和自凝牙托材料的混合填充劑 灌注；?腎集合管鑄型：輸尿管插管，采用過氯乙烯填充劑灌注?掃描電鏡：分別對(duì)梗阻前后腎小球和集合系統(tǒng)進(jìn)行觀察，比較。?三維重建：首先采用羧甲基纖維素/氧化鉛水凝膠經(jīng)腎動(dòng)脈插管灌注，使用螺旋CT掃描，利用

10、Mimics軟件重建。?凋亡檢測：石蠟切片采用TUNEL法原位檢測血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，免疫組化檢測Bcl-2 、bax 。,,研究方法,,可行性分析,?輸尿管部分梗阻模型已制備 本實(shí)驗(yàn)采用輸尿管部分梗阻模型，輸尿管部分梗阻模型報(bào)道的方法很多，各有優(yōu)缺點(diǎn)，選擇何種模型呢？通過預(yù)實(shí)驗(yàn)對(duì)輸尿管套管法和輸尿管不全結(jié)扎法兩種造模方法的對(duì)比，發(fā)現(xiàn)輸尿管套管法由于套管的刺激作用，粘連較重，解除梗阻較困難，輸尿管不全結(jié)扎法對(duì)輸尿管周圍組織粘連輕，

11、梗阻易解除，解除梗阻后尿流通暢； （圖2）,?實(shí)驗(yàn)所需的藥品試劑、儀器設(shè)備已具備：藥品試劑（圖3）壓力灌注器 （圖4）,?技術(shù)路線的設(shè)計(jì)合理可行；,?在鑄型技術(shù)上擬請(qǐng)一名經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)員指導(dǎo)灌注； （圖1）,?人員組成齊備,,,日本大耳白兔100只,,梗阻觀察組（O）48只,,正常對(duì)照組（N）12只,,,,,建模,,,,,O1組,O4組,O8組,,,,,,,,掃描電鏡,,,,,,統(tǒng)計(jì)分析,,技 術(shù) 路 線 圖,腎盂、腎盞、腎血管

12、鑄型,,大體標(biāo)本解剖,,,,,,,,,,腎動(dòng)脈分支、分段、血供及管徑測量,大體標(biāo)本觀測,,,假手術(shù)組（SO）4只,O2組,,,三維重建,血管形態(tài),,梗阻解除組36只,,,,,2周,4周,1周,,,,,,,,,,腎小球形態(tài)觀察,,凋亡,,TUNEL法 Bcl-2 、bax Hoechst,,,,,,,創(chuàng)新和特色,1.采用鑄型技術(shù)對(duì)輸尿管部分梗阻動(dòng)物模型腎血管，腎盂腎盞、腎集合管進(jìn)行灌注，對(duì)今后此類動(dòng)物模型的鑄型制作提供參考；2.采用

13、鑄型技術(shù)對(duì)輸尿管部分梗阻的腎血管形態(tài)變化進(jìn)行探討，直接觀測腎血管的變化過程，從形態(tài)學(xué)方面解釋腎積水后腎功能損害的機(jī)制；3.使用數(shù)字人虛擬技術(shù)對(duì)輸尿管部分梗阻的腎血管進(jìn)行三維重建；為數(shù)字化虛擬泌尿道血管及模擬臨床手術(shù)入路方式提供有益的經(jīng)驗(yàn)。,,實(shí)驗(yàn)進(jìn)展安排,?2009.5-2009.6 完成腎血管、腎盂腎盞、集合管鑄型及X線填充劑的配置，探索最佳的灌注濃度，進(jìn)行小樣本的預(yù)實(shí)驗(yàn)；? 2009.6-2009.12 完成梗阻前后及梗

14、阻解除組腎血管鑄型、腎盂腎盞、集合管鑄型，CT掃描，凋亡實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的檢測；? 2010.1-2010.5 完成實(shí)驗(yàn)資料的收集、分析、整理，撰寫和發(fā)表科研論文；,,,,,項(xiàng)目,支出依據(jù),金額（萬元）,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（兔）,0.8,動(dòng)物飼養(yǎng),0.9,灌注用藥品試劑,0.1,掃描電鏡,,,0.4,,TUNEL、 Bcl-2 bax檢測,,0.5,,消耗品及玻璃器材,0.1,學(xué)術(shù)交流、復(fù)印、論文發(fā)表,0.4,科研業(yè)務(wù)費(fèi),實(shí)驗(yàn)材料費(fèi),儀器設(shè)備費(fèi),合

15、計(jì),3.2,,經(jīng)費(fèi)預(yù)算,,,,,,,,,參考文獻(xiàn),[1] Murphy GP,Scott WW.The renal hemodynamic response to acute and chronic ureteral occlusions[J].Urol,1966;95(5):636-657. [2] Moody TE,Vaughn ED Jr,Gillenwater JY.Comparsion of the renal hemody

16、namic response to unilateral and bilateral occlusion[J].Invest Urol,1977;14(6):455-459.[3] cheng EY,Maizels M,Chou P,et al.Response of the newborn ureteropelvic junction complex to induced and later reversed partial ure

17、teral obstruction in the rabbit model[J].Urol,1993;150(2pt2):782-789[4] Bartrum RJ Jr,smith EH,D`Orsi CJ,et al.The ultrasonic determination of renal transplant volume[J]. Clin Ultra,1974;2(4):281-285[5] 吳階平.泌尿外科[M].濟(jì)南:

18、山東科學(xué)技術(shù)出版社,2001:272-287[6] 曾甫清,魯功成,劉博,等.一種新的可復(fù)性慢性不全梗阻性腎積水動(dòng)物模型的建立[J].臨床泌尿外科雜志,1996,11(5):299-301[7] Chevalier RL,Thornhill BA,Wolstenholme JT et al.Unilateral ureteral obstruction in early development alters growth:depen

19、dence on the duration of obstruction[J]. Urol,1999;161(1):309-313,[8] 馬勝利,葉章群,陳志強(qiáng),等.輸尿管部分梗阻后腎小球?yàn)V過率的時(shí)相性變化研究[J].武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2006,27(3):299-405[9] Ulm AH,Miller F.An operation to produce experimental reversible hydronephro

20、sis in dogs[J]. Urol,1962;88(3):337-341[10] Wen JG,Chen Y,Frokier J,et al.Experimental partial unilateral ureter obstruction,Pressure flow relationship in a rat model with mild and severe acute ureter obstruction[J]. Ur

21、ol,1998;160(4):1567-1571.[11] 李富德;,張德元.鑄型標(biāo)本填充劑的研制.吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),1992(01) :55[12] 王興海,王起云,劉牧之等.過氯乙烯鑄型標(biāo)本在電鏡掃描技術(shù)上的應(yīng)用.解剖學(xué)研究,1981(01) :121-122[13] 李忠華,王起云,鐘世鎮(zhèn).用過氯乙烯制備腎集合管掃描鑄型的方法.解剖學(xué)研究,1981(01) :123-124.[14] 張朝佑,魏寶林,侯廣棋.成人腎小

22、球鑄型的掃描電子顯微鏡觀察.解剖學(xué)報(bào),1980,11(1):1-4[15] 袁發(fā)煥,史景泉,光麗霞.不同溶劑ABS液用于大鼠腎血管鑄型的對(duì)比研究.中華物理醫(yī)學(xué)雜志,1995,17(3):139-141,[16] 李忠華.人體鑄型標(biāo)本的設(shè)計(jì)和制作[M] .廣州:華南理工大學(xué)出版社,1992 :4-19[17] 李澤宇,吳坤成,劉暢等.過氯乙烯和牙托材料的混合填充劑在鑄型標(biāo)本中的應(yīng)用. 解剖學(xué)雜志,2008,31(2):282-283

23、[18] 鐘世鎮(zhèn),韓震.有機(jī)玻璃及其單體在解剖技術(shù)學(xué)上的應(yīng)用.解剖學(xué)研究,1980(01):114-117[19] 李培.聚甲基丙烯酸甲酯、過氯乙烯在頭頸部血管鑄型標(biāo)本制作中的應(yīng)用.中外健康文摘.2007,4(9):1156[20] 黃海龍.改良環(huán)氧樹脂的幾點(diǎn)改進(jìn). 解剖學(xué)雜志,2006,29(3):23[21]Salmon M. Artè res de la peau:é tude anatomique et

24、chirurgicale[M].Paris:Masson,1936[22]Salmon M.Artè res des muscles de la te te et du cou [M].Paris:Masson,1936[23] Rees MJ, Taylor GI. A simplified lead oxide cadaver injection technique[J]. Plast Reconstr Surg, 1

25、986, 77(1): 141-145[24] Tang M, Geddes CR, Yang D. et al. Modified lead oxide-gelatin injection technique for vascular studies[J]. J Clin Anat, 2002, SRI. 1: 73-78.[25] 樓新法, 梅勁, Geddes CR,等.明膠- 氧化鉛血管造影術(shù)的優(yōu)化[J].中國臨床解剖學(xué)雜志

26、,2006.24(3): 259-262,,[26] 張志浩,李嚴(yán)斌, 梅勁,等.應(yīng)用放射造影術(shù)進(jìn)行血管3D 可視化研究初探[J].中國臨床解剖學(xué)雜志,2006,24(3):255-258[27] 梅勁,宋鐵山,戴開宇,等.人體皮動(dòng)脈的解剖學(xué)定位定量研究[J].中國臨床解剖學(xué)雜志,2006,24(3):236-239[28] 秦益民.制作醫(yī)用敷料的羧甲基纖維素纖維[J]. 紡織學(xué)報(bào),2006,27(7):97-99.[29] 劉躍

27、平,王恩浦.羧甲基纖維素水溶液流變性質(zhì)的研究[J].廣州化學(xué),1988,(2):23-28[30] BEATRIZ P.S. MARQUES-SAMPAIO, MARCO A. PEREIRA-SAMPAIO,2Dog Kidney: Anatomical Relationships Between Intrarenal Arteries and KidneyCollecting System. THE ANATOMICAL RE

28、CORD. 290:1017–1022(2007)[31] ANDREW P. EVAN, BRET A. CONNORS, JAMES E. LINGEMAN,Branching Patterns of the Renal Artery of the Pig. THE ANATOMICAL RECORD 246:217-223 (1996)[32] Zhou Y, Takahashi G, Shinagawa T, et al.

29、 Increased transforming growth factor - beta1 and tubulointerstitialfibrosis in rats with congenital hydronephrosis [J]. Int J Urol, 2002, 9(9): 491- 500[33] Chevalier RL. Pathogenesis of renal injury in obstructive uro