分光光度計(jì)的操作方法及日常維護(hù)(3月份)

1、分光光度計(jì)的操作方法及日常維護(hù)分光光度計(jì)的操作方法及日常維護(hù)一，使用方法概述一，使用方法概述1.分光光度法定義與應(yīng)用1.1定義:分光光度法是利用物質(zhì)所特有的吸收光譜來鑒別物質(zhì)或測定其含量的分析檢測技術(shù).1.2特點(diǎn):靈敏精確快速和簡便在復(fù)雜組分系統(tǒng)中不需要分離即能檢測出其中所含的極少量物質(zhì).1.3應(yīng)用:生物，化學(xué)研究中廣泛使用的方法之一廣泛用于糖蛋白質(zhì)核酸酶等的快速定量檢測.。2.分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)和工作原理2.1分光光度計(jì)的分類紅外分

2、光光度計(jì):測定波長范圍為大于760nm的紅外光區(qū)可見光分光光度計(jì):測定波長范圍為400~760nm的可見光區(qū)紫外分光光度計(jì):測定波長范圍為200～400nm的紫外光區(qū)2.2分光光度計(jì)工作原理人眼可見的光只占電磁波譜的很小—部分(400~760nm)它是一種頻率較大的電磁波.電磁波按頻率大小從頻率最小的無線電波到頻率最大的γ射線排成一列即組成電磁波的波譜。2.2.1分光光度計(jì)的光譜范圍包括波長范圍為400~760nm的可見光區(qū)和波長范圍為

3、200～400nm的紫外光區(qū).不同的光源都有其特有的發(fā)射光譜因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源.鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的400～760nm波長的光譜光通過三棱鏡折射后可得到由紅橙黃綠藍(lán)靛紫組成的連續(xù)色譜該色譜可作為可見光分光光度計(jì)的光源.氘燈的發(fā)射光譜:氫燈能發(fā)出185～400nm波長的光譜可作為紫外光光度計(jì)的光源.2.2.2物質(zhì)的吸收光譜(1)如果在光源和棱鏡之間放上某種物質(zhì)的溶液此時(shí)在屏上所顯示的(2)吸收池(比色皿)必須

4、與光束方向垂直.此外每套比色皿的質(zhì)料厚度應(yīng)完全相同以免產(chǎn)生誤差.比色皿上的指紋油污或壁上的沉積物都會(huì)顯著地影響其透光性因此在使用前務(wù)必徹底清洗.常用光電池光電管和光電倍增管三種.測量裝置—般常用的紫外光和可見光分光光度計(jì)有3種測量裝置即電流表記錄器和數(shù)字示值讀數(shù)單元.現(xiàn)代的儀器常附有自動(dòng)記錄器可自動(dòng)描出吸收曲線.(3)檢測器：棱鏡與光柵棱鏡:光波通過棱鏡時(shí)不同波長的光折射率不同因而能將不同波長的光分開.玻璃對紫外線的吸收力強(qiáng)故玻璃棱鏡多

5、用于可見光分光光度計(jì).石英棱鏡可在整個(gè)紫外光區(qū)傳播光故在紫外光分光光度計(jì)中廣為應(yīng)用.衍射光柵:在石英或玻璃表面上刻劃許多平行線(每英寸約刻15000—30000條).由于刻線處不透光通過光的干涉和衍射使較長的光波偏折角度大較短的光波偏折角度小因而形成光譜.光源照到棱鏡(或光柵)以前先要經(jīng)過一個(gè)入射狹縫再通過平行光鏡使成為平行光束投到棱鏡上.透過棱鏡的光再經(jīng)另一聚光鏡在此聚光鏡的焦面內(nèi)可得一清楚的光譜圖.如在焦線處放—出射狹縫轉(zhuǎn)動(dòng)棱鏡使光