雙酚A對(duì)大鼠未成熟Leydig細(xì)胞睪酮合成的影響及機(jī)制.pdf

1、目的:觀察雙酚A對(duì)大鼠未成熟Leydig細(xì)胞睪酮合成的影響,探討雙酚A對(duì)大鼠睪丸Leydig細(xì)胞GR、11β-HSD1及StAR蛋白表達(dá)的影響,探討雙酚A對(duì)大鼠睪丸Leydig細(xì)胞類(lèi)固醇激素代謝關(guān)鍵酶的影響。
　　 方法:出生后第21天雄性Sprague-Dawley大鼠24只根據(jù)體重隨機(jī)分成4組:正常對(duì)照組6只、雙酚A低劑量組6只(2.4ug/Kg)、中劑量組6只(1mg/Kg)、高劑量組6只(200mg/Kg)。每天早晨8:

2、00-10:00以不同劑量的雙酚A給大鼠灌胃(對(duì)照組以玉米油灌胃),每次灌胃體積為5ml/kg。出生后第35天染毒結(jié)束時(shí)處死大鼠,測(cè)量大鼠體重、睪丸重；光鏡、電鏡下觀察睪丸Leydig細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)血清睪酮濃度；免疫組織化學(xué)檢測(cè)Leydig細(xì)胞11β-HSD1及StAR蛋白；Western-blotting檢測(cè)Leydig細(xì)胞GR、11β-HSD1及StAR的蛋白表達(dá)水平；逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)睪丸Leydig

3、細(xì)胞類(lèi)固醇激素代謝關(guān)鍵酶StAR、P450scc、3β-HSD、P450c17、17β-HSD及P450arom的mRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 1.大鼠體重及睪丸重的檢測(cè)
　　 不同雙酚A劑量組大鼠體重,睪丸重及睪丸體重比與正常組對(duì)比無(wú)顯著性差異。
　　 2.大鼠睪丸Leydig細(xì)胞光鏡檢查結(jié)果
　　 不同雙酚A劑量組大鼠睪丸Leydig細(xì)胞光鏡結(jié)果均未見(jiàn)明顯異常。
　　 3.大

4、鼠睪丸Leydig細(xì)胞電鏡檢查結(jié)果
　　 高劑量組大鼠睪丸Leydig細(xì)胞線(xiàn)粒體腫脹明顯。
　　 4.大鼠血清睪酮水平
　　 低劑量組大鼠血清睪酮下降(P<0.05)。
　　 5.免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 11β-HSD1及StAR蛋白在各劑量組大鼠睪丸Leydig細(xì)胞胞漿表達(dá)陽(yáng)性。
　　 6.大鼠睪丸Leydig細(xì)胞GR、11β-HSD1及StAR的蛋白表達(dá)水平中、高劑量組大鼠睪丸Le

5、ydig細(xì)胞GR蛋白表達(dá)明顯降低(P<0.01),低劑量組的大鼠睪丸Leydig細(xì)胞GR蛋白表達(dá)升高(P<0.05)。高劑量組大鼠睪丸Leydig細(xì)胞11β-HSD1(P<0.01)及StAR(P<0.05)蛋白表達(dá)降低。
　　 7.大鼠睪丸Leydig細(xì)胞StAR、P450scc、3β-HSD、P450c17、17β-HSD及P450arom的mRNA表達(dá)水平
　　 低劑量組P450scc及3β-HSD mRNA表達(dá)水

6、平下降(P<0.05)。中劑量組各關(guān)鍵酶mRNA表達(dá)水平未見(jiàn)明顯改變。高劑量組StAR及17β-HSD mRNA表達(dá)水平下降(P<0.05),而3β-HSD mRNA表達(dá)水平升高(P<0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.低劑量雙酚A可以抑制大鼠未成熟Leydig細(xì)胞的睪酮合成。其機(jī)制可能是GR蛋白表達(dá)升高,抑制P450scc及3β-HSD mRNA的表達(dá)。
　　 2.中劑量雙酚A可以抑制GR蛋白表達(dá),但對(duì)類(lèi)固醇