db 37t 3126—2018 禽波氏桿菌免疫熒光檢測技術(shù)規(guī)范

1、ICS11.220B41DB37山東省地方標(biāo)準(zhǔn)DB37T3126—2018禽波氏桿菌免疫熒光檢測技術(shù)規(guī)范TechnicalGuidelineofImmunofluescentTestofBdetellaavium20180202發(fā)布20180302實施山東省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB37T3126—20181禽波氏桿菌免疫熒光檢測技術(shù)規(guī)范1范圍本規(guī)范規(guī)定了禽波氏桿菌病間接免疫熒光檢測技術(shù)的試劑或材料、儀器設(shè)備、禽波氏桿菌外膜蛋白（OMP）的

2、提取、禽波氏桿菌OMP含量測定、禽波氏桿菌外膜蛋白（OMP）抗血清的制備、陰性血清制備、禽波氏桿菌免疫熒光檢測方法和判定標(biāo)準(zhǔn)。本規(guī)范適用于山東省境內(nèi)從事家禽飼養(yǎng)以及從事家禽防疫活動的單位和個人禽波氏桿菌檢測。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GBT603化學(xué)試劑試驗方法中所用制劑及制品的制備GBT6

3、682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB14925實驗動物環(huán)境及設(shè)施3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1蛋白定量Bradfd法Bradfdmethodfproteinquantitation考馬斯亮藍在游離狀態(tài)下呈紅色，最大光吸收在488nm；當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)榍嗌?，蛋白質(zhì)—色素結(jié)合物在595nm波長下有最大光吸收，其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比，因此可用于蛋白質(zhì)的定量測定。蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍結(jié)合在2min左右的時間內(nèi)達到平衡

4、，完成反應(yīng)十分迅速；其結(jié)合物在室溫下1h內(nèi)保持穩(wěn)定。該法試劑配制簡單，操作簡便快捷，反應(yīng)靈敏，可測定微克級蛋白質(zhì)含量。3.2SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳SDSpolyacrylaegelelectrophesisSDSPAGE聚丙烯酰胺凝膠為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，具有分子篩效應(yīng)。SDSPAGE僅根據(jù)蛋白質(zhì)亞基分子量的不同就可以分開蛋白質(zhì)。該技術(shù)最初由shapiro于1967年建立，他們發(fā)現(xiàn)在樣品介質(zhì)和丙烯酰胺凝膠中加入離子去污劑和強還原劑（SDS，即十