反硝化細菌的分離篩選及應(yīng)用研究.pdf

1、越來越嚴重的富營養(yǎng)化，尤其是亞硝酸鹽污染已成為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)常見且難以預(yù)防的危害因素之一。微生物的反硝化脫氮法是解決上述問題的有效手段之一。 本課題通過廣泛取樣，分離出202株反硝化細菌。用滅菌的LB培養(yǎng)基調(diào)節(jié)控制水樣的CODMn約為25mg/L，以此水樣為基礎(chǔ)，通過定量測定菌株反硝化能力的方法，同時結(jié)合實驗室保存的反硝化芽孢桿菌DNF409的反硝化特點，篩選出一株同等條件下不會嚴重積累亞硝酸鹽的菌株A13。通過生理生化試驗和16S

2、rDNA序列分析，菌株A13鑒定為地衣芽孢桿菌。 研究表明：在影響反硝化效率的因素中，CODMn是關(guān)鍵因素。在CODMn低于10.5mg/L時，兩株菌A13和DNF409都只能進行微弱的反硝化作用。添加碳源后能顯著提高反硝化作用，其中以添加乙醇效果最明顯，向水樣中添加0.2％(v/v)的乙醇后，反硝化脫氮率達99％以上。在pH為6.0-8.0的范圍內(nèi)，反硝化效率沒有明顯的差別，即在自然水體中，pH不會成為反硝化脫氮的限制因素。在

3、溫度超過20℃時，反硝化作用能進行得比較完全。投菌量對反硝化作用也有明顯的影響，在CODMn為19mg/L時，一次投菌量需要達到107cfu/mL才會有明顯效果。由于反硝化作用的進行，兩株菌對降低水樣的CODMn也能起到一定的作用。 研究過程中發(fā)現(xiàn)，不滅菌水樣中，兩株菌的反硝化效率明顯優(yōu)于滅菌水樣；相同CODMn的野芷湖水樣和蒸餾水樣，前者的反硝化作用明顯優(yōu)于后者。分析可能是微生物菌群的協(xié)同反硝化作用。因此將兩株菌協(xié)同聯(lián)合應(yīng)用。

4、為了確定它們的聯(lián)合應(yīng)用方式，分別跟蹤檢測了它們各自的反硝化特點。研究結(jié)果顯示：在前12h內(nèi)，DNF409降解硝酸鹽的速度明顯優(yōu)于A13，但同時迅速積累大量的亞硝酸鹽；在前24h內(nèi)，它們都能將硝酸鹽降解到很低的水平，但DNF409積累的亞硝酸鹽比A13嚴重，隨著時間的進一步延長，達到156h時，亞硝酸鹽均會上升。根據(jù)兩株菌的不同的作用特點及協(xié)同作用原理，通過試驗建立了組合應(yīng)用模式，首先使用DNF4、09菌株，24h后再向水樣中投加A13，